Морфофункциональная характеристика пульпы зуба и оценка иммунного статуса при кариесе, его осложнениях и заболеваниях пародонта 03. 03. 04 клеточная биология, цитология, гистология 14. 01. 14 стоматология



Скачать 474,45 Kb.
страница2/3
Дата29.06.2015
Размер474,45 Kb.
1   2   3

Собственные исследования и их обсуждение
1. Результаты люминесцентно-гистохимического исследования структур пульпы зуба взрослого человека. При исследовании пульпы по методу Фалька во всех срезах пульпы зубов контрольной группы в центральном слое выявляются адренергические нервные волокна, расположенные по ходу кровеносных сосудов. От нервно-сосудистых сплетений отходят одиночные нервные терминали в виде изумрудно-зелёных нитей с варикозными расширениями, что совпадает с данными по адренергической иннервации пульпы зуба N.P. Kerezoudis et al. (1995), A. Casasco et al. (1995).

По нашим данным, адренергическая иннервация наиболее обильна в субодонтобластическом слое. Здесь же выявляются единичные ГЛК – клетки полигональной формы, со множеством ярких, желтовато-белых глыбовидных гранул, тесно контактирующие с нервными терминалями. Эти данные могут указывать на наличие функциональной связи между названными структурами.

Одонтобласты, а также собственная соединительная ткань пульпы дают диффузное слабое желтовато-зелёное свечение, обозначаемое как «фон». Люминесцентно-гистохимическими методами в пульпе зуба нами также были выявлены клетки, относящиеся к ТК, которые расположены по ходу кровеносных сосудов. Они отличаются от ГЛК меньшими размерами, удлинённой формой, наличием тёмного ядра и мелкозернистых гранул в цитоплазме.

Количественный цитоспектрофлуометрический анализ светящихся структур пульпы зуба показал, что БА в определённых концентрациях содержатся в одонтобластах, собственно соединительной ткани пульпы, нервных волокнах, кровеносных сосудах (табл. 2). D. Wang et al. (1998), исследуя методом хроматографии содержание КА в пульпе здоровых зубов, удаленных по ортодонтическим показаниям, также определили высокое содержание норадреналина, что согласуется и с нашими данными. Обработка криостатных срезов пульпы парами ортофталевого альдегида по методу Кросса позволила нам обнаружить Г во всех вышеназванных структурах.

Прямую идентификацию БА в структурах пульпы зубов взрослого человека дополнили используемые нами методы косвенного выявления этих веществ – обнаружение МАО по методу Гленнера, аргентаффинная реакция Массона-Фонтаны на индолсодержащие вещества (СТ и его метаболиты), метод окраски суданом чёрным «В» на фосфолипиды, являющиеся субстратом для связывания БА.

При глубоком кариесе в сочетании с пародонтитом лёгкой степени отмечено повышение содержания Г в ТК и КА, СТ в ГЛК при низком значении серотонинового индекса, что указывает на преобладание в них КА.

Известно, что повышенное содержание в крови и других тканях БА влияет на развитие кариеса зубов. По данным М.Г. Насибуллина (1985), повышенное содержание СТ в крови является фактором, понижающим устойчивость зубов к кариесу. Т.С. Кунанбаевой (1973) доказана роль Г в развитии кариеса зубов.

По-видимому, при прогрессировании кариеса в сочетании с пародонтитом лёгкой степени биоаминсодержащие ГЛК, расположенные в субодонтобластическом слое в непосредственной близости к пульпарно-дентинной границе, и ТК, локализованные преимущественно по



Таблица 2. Интенсивность люминесценции катехоламинов, серотонина, гистамина в структурах пульпы зуба

в норме, при кариесе и пульпите в сочетании с пародонтитом (у.е.)




VIII

3,8±0,2

8,6±0,6

5,1±0,2

21,1±1,8

34,7±3,2

13,7±1,2

13,4±1,2*

27,6±2,4



6,9±0,5

11,7±1,2

14,8±1,2*

29,1±2,6

43,2±3,4

10,9±0,7*

2,6±0,1

6,6±0,4

2,3±0,2

Примечание: * – p0,05; ** – p0,01; *** – p0,001.


VII

21,7±2,1***

22,3±2,1

18,2±1,9*

26,5±2,3

50,8±3,7

43,9±4,1*

37,2±2,6*

113,2±11,8***



13,4±1,4*

16,9±1,5

16,1±1,5*

58,7±5,2*

79,7±7,8*

22,3±2,1

12,7±1,2**

20,4±1,7

14,5±1,3*

VI

28,3±2,7***

35,1±2,6**

47,8±3,5***

34,2±2,5

56,2±2,3

167,1±14,5***

59,8±3,7**

156,4±13,7***



18,1±1,7**

22,4±1,9

25,3±2,6

81,2±7,3**

102,4±10,6**

26,5±2,5

26,3±2,4***

33,6±2,8

36,2±3,4***

V

17,4±1,5**

6,1±2,2

44,5±4,2***

37,8±2,9*

58,4±4,5

87,4±7,9***

66,4±5,3**

97,6±8,5***



19,5±1,9**

25,6±2,2

97,6±8,9**

95,6±7,8**

97,8±8,5**

52,7±4,6**

15,3±1,3**

27,3±3,5

33,4±2,9***

IV

9,5±0,8*

18,7±1,7

16,7±1,8*

46,9±3,7*

61,6±5,1

30,2±3,1

40,7±3,5*

53,7±4,1**



30,6±3,2***

40,3±3,4

192,4±17,8***

128,9±10,4***

94,6±8,3**

103,9±10,1***

7,6±0,6

17,6±2,1

9,2±1,1*

III

8,2±0,7*

21,5±1,9

14,2±1,6

32,6±3,2

58,3±4,3

32,1±2,2

37,1±2,9*

64,1±5,3**



14,8±1,3**

22,3±2,1

87,1±9,3**

75,8±6,7**

81,4±7,1*

68,7±4,6**

6,6±0,5

18,2±1,7

7,1±1,8

II

10,1±0,9*

18,7±1,6

11,5±1,1

31,4±2,9

63,7±5,4

31,7±3,8

28,5±1,5

45,9±3,8



11,7±1,1*

21,5±1,8

48,9±4,5**

47,6±3,9

63,2±5,4

39,6±3,5*

8,7±0,7*

15,9±1,0

6,5±0,5

I

4,3±0,3

15,3±1,4

5,3±0,3

29,3±2,8

47,8±3,9

19,5±2,1

25,2±2,3

43,6±3,5



7,6±0,5

15,6±1,5

26,2±2,4

40,9±3,6

57,9±4,2

15,8±1,3

3,9±0,2

13,5±2,2

4,1±0,3

БА

КА

СТ

Г

КА

СТ

Г

КА

СТ

Г

КА

СТ

Г

КА

СТ

Г

КА

СТ

Г

Группы

Структуры



Одонто-бласты

Кровеносные сосуды

Нервные волокна

Тучные клетки

Гранулярные клетки

Фон пульпы зуба

ходу кровеносных сосудов, чутко реагируют на незначительные патологические сдвиги в пульпе зуба. Эти ранние изменения предшествуют развитию острого пульпита в сочетании с пародонтитом средней степени тяжести.

Известно, что тучные клетки участвуют в воспалительном повреждении при заболеваниях полости рта у человека, в том числе пародонтите (Ledesma-Montes C. et al., 2004), а их ферменты – в разрушении межклеточного матрикса (Verma D.K. et al., 2005).

При хроническом пародонтите число ТК значительно увеличивается, они тесно контактируют с макрофагами, через секрецию цитокинов принимают активное участие в регуляции иммунного ответа и клеточной миграции (Batista A.C. et al., 2005; Steinsvoll S., 2006).

Топографическая и функциональная связь ГЛК и ТК пульпы зуба с нервными терминалями и кровеносными сосудами позволяет сделать предположение об их основной роли в биоаминной регуляции гомеостаза пульпы зуба, что приобретает особое значение в развитии патологии. При остром пульпите в сочетании с пародонтитом средней степени БА концентрируются в окружающей соединительной ткани. Это согласуется с данными G. Nagy et al (2000) и C. Nup et al. (2001), которые выявили значительное увеличение катехоламинов в воспаленной пульпе при пародонтите, по сравнению с нормой. Максимальное содержание Г при данных патологиях выявляется в кровеносных сосудах пульпы зуба. По мнению N. Shoji et al. (2006), при пульпите и пародонтите гистамин продуцируется вновь при помощи гистидиндекарбоксилазы пульпы зуба.

Вычисление соотношения СТ к Г показывает высокое влияние данного БА в одонтобластах, кровеносных сосудах, ТК, фоне соединительной ткани, где IСТ/Г меньше единицы. При остром диффузном, а также хроническом пульпите в сочетании с пародонтитом средней и тяжёлой степени соответственно в нервных волокнах пульпы зуба отмечается преобладание влияния СТ по отношению к КА, что подтверждается наибольшими значениями серотонинового индекса (IСТ/КА). По данным ряда исследователей, избыточное содержание БА в тканях, которое мы наблюдали при остром пульпите в сочетании с пародонтитом средней степени, может в дальнейшем вызвать угнетение иммунного ответа.

При хроническом пульпите в сочетании с пародонтитом тяжёлой степени наблюдается истощение нейромедиаторной системы пульпы зуба: происходит снижение содержания БА во всех исследуемых структурах, по сравнению с контрольной группой, вследствие чего замедляются процессы регенерации.



2. Результаты корреляционного анализа биогенных аминов в структурах пульпы зуба. При вычислении коэффициентов корреляции между различными БА нами выявлены высокие положительные связи в парах КА–СТ и КА–Г в большинстве структур пульпы зуба в норме и при воспалении. Это свидетельствует об однонаправленной динамике в них названных БА (рис. 1, 2). В паре СТ–Г в ТК, одонтобластах и фоне соединительной ткани пульпы зуба были обнаружены высокие отрицательные коэффициенты корреляции при кариесе, остром и хроническом пульпите в сочетании с пародонтитом лёгкой, средней и тяжёлой степени соответственно, что позволяет сделать предположение о конкурирующих взаимоотношениях СТ и Г при воспалении.

При вычислении коэффициентов корреляции между люминесцирующими структурами пульпы зуба обращают на себя внимание высокие отрицательные связи по КА и СТ в парах, образуемых ГЛК с другими структурами: одонтобластами, кровеносными сосудами, нервными волокнами и фоном соединительной ткани при развитии кариеса в сочетании с пародонтитом лёгкой степени (рис. 3). Возможно, это указывает на их биоаминодонорную роль при данных патологиях. При остром воспалении пульпы зуба в сочетании с пародонтитом средней степени эти связи нарушаются.

Преобладание высоких положительных коэффициентов корреляции по КА и СТ в парах одонтобласты – фон соединительной ткани пульпы и одонтобласты – нервные волокна при патологии указывает на сходную динамику в них БА. По-видимому, топографические связи нервных волокон и одонтобластов, на которые указывает K. Fried (1992), дополняются их корреляционной зависимостью.

Следует отметить, что при остром пульпите в сочетании с пародонтитом средней степени в парах, образуемых ТК с другими люминесцирующими структурами, наблюдаются высокие отрицательные корреляционные связи по Г, которые нарушаются при хроническом пульпите в сочетании с пародонтитом тяжёлой степени (рис. 4). Это может свидетельствовать о центральной роли ТК в обеспечении пульпы зуба Г при остром воспалении в сочетании с пародонтитом средней степени.



3. Результаты иммуногистохимического исследования пульпы зуба на нейроэндокринные маркёры. Параллельно проведённое иммуногистохимическое исследование с помощью моноклональных антител к антигенным маркёрам нейроэндокринных клеток – хромогранину А, синаптофизину, НСЭ – позволило нам выявить положительные клетки в пульпе зуба.



EMBED MSGraph.Chart.8 \s
Если в контрольной группе иммунопозитивные клетки единичны, выявляются в субодонтобластическом слое, то при развитии кариозной патологии происходит увеличение их числа с максимумом при глубоком кариесе в сочетании с пародонтитом лёгкой степени, а при воспалении пульпы в сочетании с пародонтитом средней степени их число, наоборот, снижается. Следовательно, изменения их морфофункциональных свойств наблюдаются уже при начальном поражении твёрдых тканей зуба и предшествуют развитию острого воспалительного процесса в пульпе.

Параллельная окраска срезов альдегид-фуксином по Гомори позволила нам выявить в субодонтобластическом слое пульпы зубов контрольной группы единичные альдегидфуксин-положительные клетки, совпадающие по локализации с ГЛК. Динамика этих клеток при кариесе и его осложнениях в сочетании с пародонтитом соответствует динамике ГЛК. Таким образом, гранулярные клетки пульпы зуба дают положительную реакцию на БА, МАО, хромогранин А, синаптофизин и НСЭ, обладают аргентаффинностью, суданофилией и альдегид-фуксинофилией, что заставляет нас, основываясь на литературных данных, отнести их к APUD-системе.

В настоящее время пересмотрен один из фундаментальных постулатов классической биологии о том, что гормональная функция является специализированной функцией лишь эндокринных клеток, имеющих общее происхождение и сходное строение. По мнению И.М. Кветного с соавт. (2003), этот постулат был отчасти уже подвергнут сомнению, когда идентичные БА и пептидные гормоны были обнаружены в нейронах и APUD-клетках различных органов и тканей, объединенных впоследствии в диффузную нейроэндокринную систему. Сейчас общепризнано, что локализованные практически во всех органах и продуцирующие биологические активные вещества клетки диффузной нейроэндокринной системы выполняют роль регуляторов гомеостаза, реализуя своё действие через нейрокринные, эндокринные и паракринные механизмы (Акмаев И.Г. с соавт., 2001). В связи с этим их можно рассматривать как неотъемлемое звено и часть универсальной системы контроля и защиты организма, а секретируемые ими гормональные вещества как сигнальные молекулы для локальной координации межклеточных взаимодействий.

Таким образом, помимо типичных элементов соединительной ткани, пульпа зуба содержит клетки, которые мы относим к нейроэндокринным, поскольку они обладают альдегидфуксинофилией и вырабатывают БА и нейропептиды – НСЭ, синаптофизин и хромогранин А. Наибольшая концентрация иммунореактивных клеток была выявлена в субодонтобластическом слое пульпы. Эти клетки местами тесно контактируют с нервными волокнами, содержащими биогенные амины и нейропептиды.

В.В. Яглов (1993) называет APUD-систему диффузной эндокринной системой. Воспринимая информацию из внешней и внутренней среды организма, клетки диффузной эндокринной системы реагируют выделением биогенных аминов и пептидных гормонов, оказывающих как локальные, паракринные эффекты, так и дистантные, эндокринные влияния. По мнению В.В. Яглова (1993), выделяемые клетками диффузной эндокринной системы и тучными клетками биологически активные вещества регулируют в очаге иммунного воспаления процессы микроциркуляции, метаболизма, пролиферации фибробластов и функциональную активность иммунокомпетентных клеток.

4. Результаты исследования популяции тучных клеток пульпы зуба. Кроме гранулярных клеток, нами была изучена популяция ТК пульпы зуба, которые являются огромным по ёмкости депо медиаторов (Быков В.Л., 1999). В настоящее время их также относят к числу APUD-клеток (Акмаев И.Г. с соавт., 2001). Благодаря секреции разнонаправленных по действию БА, ТК регулируют просвет и проницаемость сосудов, играя немаловажную роль в патогенезе отёка тканей. Содержание в цитоплазме ТК гистамина и гепарина обусловливает их участие в острых и хронических воспалительных процессах в полости рта (Гемонов В.В. с соавт., 2002).

По нашим данным, спектрофлуориметрический анализ выявляет в ТК пульпы зуба взрослого человека Г, СТ и КА. Однако предпринятое нами вычисление индекса соотношения СТ и Г показало преимущественное преобладание в ТК пульпы зуба Г над СТ во всех исследуемых случаях, кроме хронического фиброзного пульпита в сочетании с пародонтитом тяжёлой степени, где IСТ/Г превышал единицу. Возможно, благодаря секреции разнонаправленных по действию БА, ТК не только регулируют проницаемость сосудов, но и участвуют в поддержании биоаминного гомеостаза в ходе обмена веществ (Гордон Д.С. с соавт., 2001).

С целью изучения популяции ТК пульпы зуба нами применялся метод Унна, позволяющий оценить состояние тканевых мукополисахаридов и гепарина. В интактной пульпе зуба обнаружены единичные молодые ТК небольших размеров, без признаков дегрануляции, расположенные по ходу кровеносных сосудов, с плотно упакованными ярко-жёлтыми гранулами, высоким содержанием БА, обладающие ортохромазией, аргентафинностью, суданофилией и слабой реакцией на МАО.

В научной литературе вопрос о присутствии ТК в интактной пульпе зуба взрослого человека является предметом дискуссии. Есть мнение, что ТК пульпы зуба имеются только у детей, а у взрослых в норме отсутствуют (Гемонов В.В. с соавт., 2002). Также считается, что они являются обычными клеточными элементами пульпы, причём при воспалении их число резко увеличивается (Быков В.Л., 1998). Наши данные решают спорный вопрос о присутствии в интактной пульпе ТК положительно. Предыдущие исследователи пытались обнаружить ТК в пульпе, применяя методы деминерализации. Известно, что кислотная деминерализация разрушает люминесцирующие ТК. Используя метод экстирпации пульпы и окрашивание метахроматическими красителями, мы доказали наличие ТК в невоспаленной пульпе.

По нашим данным, при кариесе и остром пульпите в сочетании с пародонтитом возрастает число β-метахроматичных, зрелых клеток с тускло люминесцирующими желтовато-оранжевыми отдельными различимыми гранулами и признаками начавшейся дегрануляции.

Поскольку гепарин, содержащийся в ТК, участвует в инактивации БА (Schwartz L. et al., 1993), полученные результаты могут косвенно свидетельствовать о чрезмерном увеличении уровня медиаторов при воспалении, что подтверждают данные спектрофлуориметрии.

Таким образом, начальное повреждение пульпы в сочетании с пародонтитом приводит к активации процессов дифференцировки ТК, а также повышению их функциональной активности. При прогрессировании воспалительного процесса начинают доминировать дегранулирующие ТК, создающие вокруг себя насыщенное БА микроокружение.

При хроническом пульпите в сочетании с пародонтитом тяжёлой степени нами выявлено сокращение общей численности ТК. Среди них преобладают ТК, которые часто выглядят опустошёнными, дают слабую реакцию на липиды и серебро, отличаются тусклым свечением под люминесцентным микроскопом с наличием единичных мелких оранжевых гранул. Присутствие данных форм ТК при хронизации воспаления в сочетании с пародонтитом тяжёлой степени свидетельствует о «старении» популяции ТК, что вносит определённый вклад в истощение нейромедиаторной системы пульпы зуба.


1   2   3


База данных защищена авторским правом ©zubstom.ru 2015
обратиться к администрации

    Главная страница