Экспериментальное обоснование разработки средств профилактики при сочетанном воздействии на животных токсичных элементов, микотоксинов и пиретроидов 16. 00. 04 ветеринарная фармакология с токсикологией; 16



страница1/3
Дата29.06.2015
Размер0,6 Mb.
  1   2   3
На правах рукописи

ПАПУНИДИ ЭЛЛАДА КОНСТАНТИНОВНА

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ ПРОФИЛАКТИКИ ПРИ СОЧЕТАННОМ ВОЗДЕЙСТВИИ НА ЖИВОТНЫХ ТОКСИЧНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ, МИКОТОКСИНОВ И ПИРЕТРОИДОВ

16.00.04 – ветеринарная фармакология с токсикологией;

16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Казань – 2008

Работа выполнена в ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» и ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины».

Научные консультанты: доктор биологических наук, профессор

Иванов Аркадий Васильевич

доктор биологических наук, профессор



Тремасов Михаил Яковлевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Хисматуллина Наиля Анваровна

доктор биологических наук, профессор



Бузлама Виталий Соломонович

доктор ветеринарных наук, профессор



Софронов Владимир Георгиевич

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский

институт ветеринарной санитарии,

гигиены и экологии РАСХН

Защита состоится «___»___________2009 года в 1000 часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (420075, Казань, Научный городок-2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных».

Автореферат разослан «___»___________2009 года.


Ученый секретарь диссертационного совета,

Кандидат ветеринарных наук,

Ст.научный сотрудник В.И. Степанов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Обеспечение населения экологически безопасными продуктами животноводства в настоящее время становится актуальной проблемой. Бурное развитие промышленности, интенсификация сельского хозяйства, химизация животноводства с целью ускорения роста и откорма, терапия и профилактика болезней животных приводит к загрязнению окружающей среды. Контаминирующие вещества в различных сочетаниях поступают и накапливаются в продуктах животноводства, что является опасным для человека при их потреблении. Продукты, содержащие большое количество вредных веществ, приводят к возникновению у людей острых и хронических токсикозов, снижают резистентность организма, вызывают аллергические реакции, нарушают обмен веществ (В.И. Фисинин, 2006; А.Л. Иванов, 2006; И.М. Донник, И.А. Шкуратова, 2008).

Особую опасность для человека представляют соли тяжелых металлов, пиретроиды и микотоксины. Индивидуальная токсичность перечисленных веществ изучена и доказана экспериментальным путем, установлены предельно допустимые концентрации в продуктах животноводства, а также разработан и предложен целый ряд средств для их детоксикации при поступлении в организм животных. Сочетанное действие данных токсикантов остается малоизученным и является весьма актуальной проблемой (М.Я. Тремасов, А.В. Иванов, 2005; Р.Г. Ильязов, Ф.Х. Шакиров, Л.П. Зарипова, 2006; А.М. Смирнов, В.И. Дорожкин, Г.А. Таланов, 2007).

Важным направлением совершенствования технологии ветеринарно-профилактических мероприятий является внедрение в производство новых средств и методов профилактики и лечения сочетанных токсикозов животных, в том числе с применением препаратов, обладающих биоактивными свойствами, способными оказывать регулирующее влияние на интенсивность обменных процессов, усиливать функциональную активность органов и систем организма, повышать уровень естественной резистентности животных (К.Х. Папуниди, А.В. Иванов, М.Г. Зухрабов, 2000; С.В. Шабунин и др., 2006; В.А. Антипов, М.П. Семененко, А.С. Фонтенецкий, 2007).

К таким веществам относится большая группа природных алюмосиликатных минералов, обладающих уникальными сорбционными, ионообменными, связующими и другими свойствами. В эту группу входят цеолиты, бентониты, опоки и т.д. В последние годы накоплен большой опыт по применению природных минералов в сельском хозяйстве. Их используют в земледелии, ирригационном строительстве, производстве комбикормов (Ф.Г. Ахметов, А.В. Иванов, М.Я. Тремасов, 2003; И.Н. Миколайчик, 2005; А.Ф. Яхин, В.С. Зотеев, А.А. Никишов, 2005).

В этой связи изучение сочетанного действия солей тяжелых металлов, пиретроидов и микотоксинов на организм животных, динамики распределения их в органах и тканях, ветеринарно-санитарная оценка мяса и разработка средств профилактики токсикозов является одной из актуальных проблем ветеринарной медицины и животноводства и имеет большое научное, теоретическое и практическое значения.

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ отдела токсикологии ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» по заданию «Токсикологическая безопасность» (Рег. номер 01200202603) и кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины» по теме «Разработка способов повышения продуктивности животных и улучшения качества продуктов животноводства» (№ 8.014).



Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение токсичности сочетанного воздействия Т-2 токсина, солей тяжелых металлов и пиретроидов на животных, влияние их на обменные процессы, продуктивность, качество мяса и других продуктов с разработкой рекомендаций по коррекции нарушений обмена веществ и профилактики токсикозов с использованием природных минералов.

В задачи исследований входило следующее:

- Провести скрининг и дать оценку энтеросорбентов различной природы;

- Изучить параметры общетоксического действия цеолитов Майнского месторождения Ульяновской области на организм животных;

- Изучить влияние цеолитов на обменные процессы и продуктивность свиней и крупного рогатого скота;

- Изучить влияние сочетанного воздействия тяжелых металлов, пиретроидов и микотоксинов на биохимические, иммунобиологические показатели и продуктивность животных;

- Установить особенности распределения тяжелых металлов, пиретроидов и микотоксинов в органах и тканях организма при сочетанном воздействии их на животных;

- Определить качество мяса у животных при сочетанном воздействии токсинов;

- На основании проведенных экспериментов разработать нормативную документацию по профилактике сочетанных токсикозов животных.

Научная новизна. Впервые на основе комплексных исследований по изучению сочетанного воздействия тяжелых металлов, пиретроидов и микотоксинов на клинические, биохимические, иммунобиологические показатели и продуктивность животных установлено взаимоусиливающее негативное действие токсикантов различных групп, представляющие экологическую и социальную опасность, разработаны средства по снижению их влияния на здоровье животных и безопасность животноводческой продукции.

Показаны особенности накопления и распределения в органах и тканях животных токсинов при сочетанном воздействии.

Установлено, что мясо и продукты убоя, полученные от животных, подвергнутых воздействию токсикантов, характеризуются низким качеством по органолептическим, микробиологическим и физико-химическим показателям, а также пониженной пищевой ценностью и неполноценностью полученной продукции.

Изучены токсикологические свойства цеолитов, установлено их положительное влияние на организм в целом и функции различных органов и систем животных. Экспериментально обоснована эффективность их применения для оптимизации обменных процессов, коррекции микроэлементной недостаточности, повышения уровня неспецифической резистентности организма и профилактики токсикозов животных.

Научная новизна исследований защищена патентом РФ на изобретение № 96105477113(009894) от 10.10.96г.

Практическая ценность работы. В результате исследований решена крупная научная проблема по получению экологически безопасной продукции, имеющая народнохозяйственное значение.

Полученные результаты позволяют по-новому оценить проблему сочетанных и комбинированных воздействий на животных химических и биологических средств и рекомендовать средства для профилактики токсикозов и возможности использования мяса и мясопродуктов.

Материалы диссертационной работы вошли составной частью в следующие нормативные документы:

- Временное наставление по применению минеральной кормовой добавки «Майнит» в животноводстве и птицеводстве, утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ в 1995 г.;

- Рекомендации по борьбе со смешанными микотоксикозами животных в Республике Татарстан, утв. Министерством сельского хозяйства и продовольствия Республики Татарстан, 2007 г.

На основании собственных исследований, а также обобщения данных литературы, в соавторстве разработаны:

- Санитарно-микологическая оценка кормов и улучшение их качества. М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2006. – 32 с.

- Рекомендации по диагностике, лечению и профилактике отравлений животных синтетическими пиретроидами. М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2007. - 20 с.



Апробация работы. Результаты экспериментальных исследований, явившиеся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены: на заседаниях Ученых советов Казанской государственной академии ветеринарной медицины и ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 1997-2008 гг., на Международных и Всероссийских научно-практических симпозиумах и конференциях в гг. Воронеже, Ижевске, Екатеринбурге, Казани, Троицке, Саратове и др. в 1997-2008 годах.

Основные положения, выносимые на защиту:

- разработка средств, обеспечивающих получение экологически чистой и биологически полноценной животноводческой продукции при сочетанном воздействии токсических элементов, пиретроидов и микотоксинов;

- токсикологическая оценка цеолитов Майнского месторождения Ульяновской области РФ;

- биохимические и иммунобиологические показатели крови и продуктивность животных при сочетанном воздействии тяжелых металлов, пиретроидов и микотоксинов;

- особенности накопления и распределения тяжелых металлов, дециса и микотоксинов в органах и тканях при сочетанном воздействии их на животных;

- органолептические, микробиологические и физико-химические показатели мяса при экспериментальном сочетанном токсикозе;

- применение цеолитов для нормализации обмена веществ, детоксикации продуктов животноводства и профилактики токсикозов при сочетанном воздействии тяжелых металлов, пиретроидов и микотоксинов.

Публикация результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 33 научные работы, в том числе 9 статей, рекомендованных ВАК РФ, изданиях «Ветеринария», «Ветеринарный врач» и «Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины».

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 285 страницах стандартного компьютерного набора и включает общую характеристику работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы, практические предложения и приложения. Библиографический список включает 475 источника, в том числе 135 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 43 таблицами и 49 рисунками.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проведены в отделе токсикологии ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных, на кафедрах фармакологии с токсикологией и ветеринарно-санитарной экспертизы Казанской государственной академии ветеринарной медицины, в учебно-опытном хозяйстве КГАВМ и в ООО «Агрофирма» «Сарсазы» Чистопольского района Республики Татарстан в 1996-2008 гг.

В опытах использовано 221 белая крыса, 12 морских свинок, 45 кроликов, 72 свиньи, 21 овца и 60 крупного рогатого скота. Кормление животных осуществляли в соответствии с общепринятыми детализированными нормами с учетом технологических особенностей для вида лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Условия постановки и схема проведения опытов, количество и вид животных, дозы цеолитов и токсикантов приведены в соответствующих разделах работы.

Общетоксические свойства цеолитов оценивали путем определения острой и хронической токсичности, возможных побочных свойств и отдаленных последствий в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР (1985) и «Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998).

Показателями определения острой токсичности служили: внешний вид животных, состояние кожного покрова, поведение (возбуждение или угнетение, подвижность, изменение походки, реакции на внешние раздражения, выделения из глаз, рта, мышечные подергивания, тремор, судороги, параличи, парезы и т.д.).

Параметры хронической токсичности изучали по общепринятым методикам на белых крысах и поросятах. Цеолиты задавали ежедневно в течение 3-х и 6-ти месяцев по непрерывной схеме из расчета 1-5% к сухому веществу корма. Учитывали клиническое состояние, аппетит, динамику прироста массы тела.

Выявление кожно-резорбтивного действия изучаемых веществ проводилось по методике И.В. Саноцкого (1970) на белых крысах, местное действие проверяли на кроликах методом накожных аппликаций и конъюнктивальной пробой.

Исследования по изучению эмбриотоксической и тератогенной активности цеолитов были проведены общепринятыми методами на белых крысах с массой тела 180-200 г при ежедневной их даче на протяжении всего срока беременности. Показателями общего постнатального развития служили динамика массы тела крысят, время открытия глаз, появление шерсти, двигательная активность, координация движений и выживаемость.

О токсическом действие препаратов при сочетанном их воздействии судили по клиническим показателям, изменениям в белковом, липидном, углеводном, минеральном обменах, общей неспецифической резистентности организма, интенсивности роста и продуктивности животных.

При гематологических исследованиях определяли количество эритроцитов и лейкоцитов, выводили лейкоформулу, содержание гемоглобина и СОЭ (А.А. Кудрявцев и др., 1969; И.П. Кондрахин, 2004).

Биохимические исследования состояли из определения в сыворотке крови общего белка, белковых фракций (нефелометрически), мочевины, общего кальция, неорганического фосфора, глюкозы, активности трансаминаз, щелочной фосфатазы, мочевую кислоту, билирубина, холестерина, общих липидов, креатинина на анализаторе EXPRESS PLUS. Макро- и микроэлементы в крови, органах и тканях животных определяли атомно-абсорбционным методом, Т-2 токсин и децис хроматографическими методами.

Для определения факторов неспецифической резистентности использовали тест бактериального фагоцитоза нейтрофилов с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям Staphylococcus aureus (№ 209Р) по И.В. Нестеровой и др. (1996). Бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) определяли по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), лизоцимную (ЛАСК) – по Д.Г. Дорофейчук, Т-, В-, ОК-лимфоциты – методом Пирса в модификации Н.Н. Гугушвили с соавт. (2000) с прочным синим и нафтилацетатом.

О качестве мяса животных судили по результатам ветеринарно-санитарной оценки, которая включала в себя органолептическую и дегустационную оценку мяса и жира, биохимические исследования и определение степени бактериальной обсемененности.

Патоморфологические исследования проводили на кафедре патологической анатомии сельскохозяйственных животных КГАВМ под руководством профессора Залялова И.Н.

Кусочки органов для патогистологического исследования фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. После формалиновой фиксации препараты промывали в проточной воде в течение суток. Проводку и заливку осуществляли общепринятыми методами (Меркулов Г.А., 1969). Уплотнение материала осуществляли путем заливки в парафин. После этого готовили серийные парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм при помощи микротома МС-2.

Затравку животных токсикантами проводили совместно со старшим научным сотрудником Егоровым В.И. и аспиранткой Софроновой С.А., за что выражаю им благодарность.

Полученные в опытах данные подвергнуты биометрической обработке с помощью программного обеспечения фирмы Microsoft®, фирмы Carl Zeiss®. Критерии достоверности определяли по таблице Стъюдента.


3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Изучение in vitro сорбционных свойств препаратов различных групп в отношении тяжелых металлов, микотоксинов и пиретроидов

Сравнительную оценку сорбционных свойств 11 препаратов к свинцу ацетату, кадмию хлориду, Т-2 токсину и дельтаметрину (децису) проводили в кислой и щелочной среде. В опытах использованы следующие препараты:



  1. Цеолит Майнского месторождения Ульяновской области.

  2. Бентонит Биклянского месторождения Республики Татарстан.

  3. Бентонит Тарн-Варского месторождения Республики Татарстан.

  4. «Зоокарб» - углеродный энтеросорбент, разработанный в научно-техническом учреждении «Конструкторско-технологический институт технического углерода» СО РАН.

  5. Полисорб - высокочистый, высокодисперсный кремнезем.

  6. «Микосорб» - органический сорбент микотоксинов, на основе клеточных стенок дрожжевых клеток, производство компании «Оллтек», Ирландия.

  7. Фитосорбент – растительный сорбент, разработанный в КГТУ.

  8. «Микофикс Плюс» - сорбент микотоксинов, производство Австрия.

  9. «Микофикс Селект» - сорбент микотоксинов, производство Австрия.

  10. «Молд Карб» - сорбент микотоксинов, производство компании «Кемин», Бельгия.

  11. «Экосил» - энтеросорбент, производство компании «Агромолпрод», Россия.

Результаты опытов по изучению сорбирующих свойств препаратов по отношению к тяжелым металлам представлены на рис. 1 и 2.

Из рис. 1 видно, что максимальные сорбционные свойства при температуре 380С и рН 2 проявили цеолит Майнского месторождения (80,5%), полисорб (60,2%) и бентонит Биклянского месторождения (58,5%). При повышении рН до 7 адсорбционная способность повышалась у цеолита с 80,5 до 91,5%. Наименьшую сорбционную способность к свинцу при рН 2 проявил фитосорбент (9,5%), а при рН 7 она понижалась до 4,5%.

Из рис. 2 следует, что лучше сорбировали кадмий при рН 2 и температуре 380С цеолит Майнского месторождения (60,2%) и бентонит Биклянского месторождения (38,6%).

Данные по изучению адсорбционных свойств энтеросорбентов in vitro в отношении Т-2 токсина представлены на рис. 3 и 4.

Из рис. 3 видно, что максимальные адсорбционные свойства при комнатной температуре и рН 7 сорбенты проявили в следующей последовательности: цеолит (63,4%) бентониты Тарн-Варского и Биклянского месторождений (61,5 и 51,0%), «Молд Карб» (59,6%), «Микосорб» (57,7%), «Микофикс Плюс» (52,5%), «Зоокарб» (42,1%), «Микофикс Селект» (37%). Наименьшую сорбционную способность к Т-2 токсину показал «Экосил» (9,9%). При снижении рН до 2 сорбенты «Микофикс Плюс» и «Микофикс Селект» резко уменьшили адсорбционную способность, у остальных сорбентов существенного снижения или увеличения сорбционной способности не происходило.

Как видно из рис. 4, при увеличении рН до 7,0 цеолит, бентонит, зоокарб и экосил увеличили адсорбцию токсина. У других сорбентов адсорбция токсина изменилась незначительно.

Изучение адсорбционных свойств энтеросорбентов in vitro в отношении дельтаметрина представлено на рис. 5.
Из рис. 5 видно, что все исследуемые сорбенты показали определённую адсорбционную способность к пиретроиду дельтаметрину, различия были незначительны. Максимальные адсорбционные свойства при рН 7 сорбенты проявили в следующей последовательности: цеолит (68,3%) бентонит Биклянского месторождения (64,5), «Зоокарб» (65,8%), полисорб (56,7%). При снижении рН до 2 сорбенты несколько увеличили адсорбционную способность.

Исследования in vitro показали, что из изучаемых сорбентов наибольшей способностью сорбировать тяжелые металлы, Т-2 токсин и децис обладал цеолит Майнского месторождения Ульяновской области. Поэтому дальнейшие исследования при сочетанных воздействиях токсикантов проводились с этим препаратом.


3.2. Токсикологическая оценка цеолитсодержащей породы Майнского месторождения Ульяновской области

Цеолитсодержащая порода Майнского месторождения Ульяновской области представляет собой порошкообразную массу белого цвета, без запаха, в воде нерастворима. В состав породы входят: цеолит – 22%, кальцит – 18%, опалкристобалит – 23%, глинистые минералы (оксиды кремния, алюминия, кальция, железа и других соединений) – 37%. Количество токсичных элементов (ртуть, свинец, кадмий, мышьяк, фтор) и радионуклидов значительно ниже предельно-допустимых концентраций.

Первая серия опытов по изучению острой токсичности цеолитов проводилась при внутрижелудочным введением их 40 белым крысам в дозах от 2 до 24 г/кг массы тела. Установлено, что ни одна из испытуемых доз не вызывала гибели подопытных животных. При дозах от 2 до 12 г/кг массы тела каких-либо отклонений со стороны поведенческих реакций и общего состояния белых крыс не выявлено. При введении препарата в более высоких дозах, через 25-40 мин опытные животные были угнетены, отказывались от корма, а спустя 7-8 часов указанные признаки проходили и опытные крысы внешне не отличались от интактных.

Вторая серия опытов по изучению острой токсичности цеолитов, проводилась на 12 клинически здоровых поросятах с массой тела от 7,1 до 8,2 кг. Для этого опытным поросятам внутрь с помощью зонда вводили однократно цеолиты в дозе 20 г/кг массы тела. Контрольным животным в этих же дозах вводили дистиллированную воду.

В опытах было установлено, что исследуемая доза цеолитов не вызывает клинических признаков отравления и гибели поросят.

Исследования по определению кумулятивных свойств цеолитов были проведены на 20 половозрелых белых крысах обоего пола. В течение первых 4 суток животным вводили в желудок водную взвесь цеолитов в дозе 2 г/кг массы тела, затем в каждые последующие 4 дня дозу препарата увеличивали в 1,5 раза и так до конца опыта (24 дня).

Исследованиями установлено, что на 15-й день введения цеолита (суммарная доза 58,25 г/кг) у животных в течение 2-3 часов отмечали угнетение, кратковременный отказ от корма. Начиная с 17 суток и до конца дачи препарата, крысы отказывались от корма, были угнетены, забивались в угол клетки. В таком состоянии, после дачи животным препарата, они находились в течение 4-6 часов. За весь период опыта гибель подопытных крыс не отмечали. Если общую суммарную дозу – 166,3 г/кг разделить на гипотетическую ЛД50 – 20 г/кг, то в соответствии с формулой Кагана и Станкевича коэффициент кумуляции составляет 8,03, что свидетельствует об отсутствии кумулятивного действия у цеолитов.

Эксперименты по определению раздражающего действия цеолитов проводились на 10 кроликах обоего пола (светлой масти) и 10 белых крысах. Для этого участок кожи 5х5 см за день до опыта тщательно выстригали на спине, слева и справа от позвоночника.

Препарат наносили на кожу в виде кашицы на дистиллированной воде из расчета 20 мг/см2 (контроль 0,02 мл дистиллированной воды/см2), при экспозиции 4 часа. Спустя 4 часа остатки препарата удаляли теплой водой с мылом. Реакцию кожи регистрировали через 1 и 18 часов в сравнении с контролем. За период эксперимента каких-либо функциональных нарушений кожи (эритема, отек, трещины, изъязвления, изменения температуры) не отмечено.

В следующей серии опытов на 5 кроликах изучали влияние цеолитов на слизистую оболочку глаз. В конъюнктивальный мешок левого глаза кроликов вносили цеолиты в нативном виде в количестве 50 мг, а правый глаз служил контролем. Спустя 30-60 мин после нанесения препарата на слизистую глаза отмечали небольшую гиперемию сосудов, которая исчезала через 20-24 часа с момента нанесения. Отека слизистой оболочки глаза не наблюдали, выделений из глаза не было.

Исследования по изучению аллергизирующего действия цеолитов проведены на 12 морских свинках массой 580-700 г, разделенных на две равные группы – опытную и контрольную. Препарат вводили морским свинкам в желудок в виде взвеси в дозе 5 г/кг массы тела, контрольным животным вводили 5 мл дистиллированной воды. Через 3 часа морским свинкам обеих групп инъецировали подкожно гистамин в дозе 6,5 мг/кг массы тела в виде 0,1% водного раствора.

Время наступления гистаминового шока в контрольной группе равнялось 17,5±0,2 мин, а в опытной - 17,3±0,8 минут. Гибель животных в обеих группах наступала через 51-65 мин, в опытной и контрольной группах пало по 2 животных, оставшиеся в живых, приходили в исходное состояние спустя 3,5-4 часа с момента введения гистамина.

При исследовании крови установили, что гематологические показатели были в пределах нормы, а иммунологические тесты также не показали наличия признаков сенсибилизации. Время наступления гистаминового шока как в опытной, так и в контрольной группах было практически одинаковым, что говорит об отсутствии аллергизирующего действия целлитов.

Для изучения хронической токсичности цеолитов было взято 40 растущих белых крыс массой 80-90 г в возрасте 55-60 суток, которые были разделены на 4 группы (по 10 крыс в каждой группе).

Суточная доза цеолита для крыс первой группы составляла 200,0; второй – 300,0; третьей – 400,0 мг на кг живой массы. Препарат давали крысам ежедневно перорально с кормом. Контрольным крысятам препарат в рацион не включали.

В конце эксперимента (через 6 мес) живая масса крыс первой и второй групп превосходила контрольный показатель соответственно на 16 и 20%. Прирост живой массы крыс третьей группы по сравнению с контрольными животными был незначителен.

Результаты исследований гематологических показателей крыс представлены в табл. 1.

Таблица 1– Гематологические показатели белых крыс, получавших в течение 6 мес цеолит (n=5)



Показатель

Группа животных

контроль

1

2

3

Через 3 мес

Гемоглобин, г/л

105,8±8,7

114,6±9,7*

116,5±10,2*

114,3±8,9*

Эритроциты,х1012

7,0±0,04

8,20±0,02*

8,18±0,03*

8,10±0,05*

Лейкоциты, х109

12,07±0,68

12,49±0,06

12,21±0,05

12,76±0,04

Через 6 мес

Гемоглобин, г/л

109,8±10,2

120,7±11,2*

121,8±8,8*

118,3±8,9*

Эритроциты, х1012

7,18±0,03*

8,29±0,03*

8,18±0,04*

8,10±0,05*

Лейкоциты, х109

11,05±0,68

12,86±0,17

12,06±0,07

12,50±0,12

* Р<0,05

Данные таблицы свидетельствуют о том, что содержание эритроцитов и гемоглобина в крови опытных крыс не выходило за пределы физиологической нормы, но превышало контрольные величины на 10-16%. Количество лейкоцитов имело тенденцию к увеличению во всех опытных группах по сравнению с контролем.

Показатели белкового и углеводного обмена не выходили за пределы физиологической нормы и от контрольных величин существенно не отличались. Наблюдалась лишь тенденция увеличения количества гамма-глобулинов в сыворотке и глюкозы в крови опытных крыс, что свидетельствует о повышении неспецифической резистентности организма животных в ответ на введение в рацион цеолитов.

При патологоанатомическом вскрытии спустя 3 и 6 мес с начала экспериментов у всех животных опытных групп отмечена небольшая гиперемия слизистой желудка, тонкий и толстый отделы кишечника не отличались от таковых контрольной группы крыс.

В следующей серии опытов изучена хроническая токсичность цеолитов на поросятах 2-месячного возраста, подобранных по принципу аналогов. При постановке эксперимента было сформировано 4 группы по 5 животных в каждой.

Основной рацион состоял из комбикорма СК-3, СК-4. Поросята второй, третьей и четвертной групп дополнительно к рациону получали цеолиты в количестве 1%, 2% и 4% от массы комбикорма в течение 90 дней.

Результаты исследований не выявили токсического действия цеолитов при их длительном скармливании, напротив, в ходе эксперимента было отмечено их положительное влияние на обменные процессы и продуктивность поросят.

Введение препарата способствовало увеличению массы тела поросят и лучшему их росту. Так, среднесуточный прирост массы тела при даче 1% цеолитов составил 305 г, при 2% - 333 г, при 4% - 315 г, что по сравнению с контролем (290) составило 105,2%, 114,9% и 108,8% соответственно.

Установлено, что гематологические показатели находились в пределах нормы, цеолиты не оказывали токсического воздействия на клеточный состав крови, наоборот, в некоторой степени стимулировали эритропоэз, белковый и углеводный обмены. При применении цеолитов из расчета 2% к массе комбикорма уровень гемоглобина (Р<0,05) повысился на 13% и 16% по группам относительно исходных показателей и на 4,7% и 7,0% в сравнении с показателями контроля, количество общего белка к концу эксперимента повысилось в I-ой опытной группе на 8,1%, III-ей – на 5,3% относительно исходных показателей и на 6,3% и 3,0% соответственно, относительно контрольной группы. Концентрация общих липидов к окончанию эксперимента незначительно увеличилась, уровень глюкозы достоверно повысился.

В лейкоцитарной формуле не выявлено отклонений от физиологических значений по уровню нейтрофилов и эозинофилов, что показывакт об отсутствие токсического и аллергизирующего воздействия цеолитов.

Постоянное клиническое наблюдение за поросятами, получавшими цеолиты, показало, что состояние животных было удовлетворительным, аппетит сохранен, подвижность соответствовала физиологическому уровню, характерному для данного возраста.

Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия цеолитов проводилось на 50 самках и 25 самцах белых крыс половозрелого возраста живой массой 180-200 г, которые были сформированы по принципу аналогов и разделены на 2 равнозначные группы по 25 самок, первая служила контролем, а вторая - опытная.

Оплодотворенным самкам зондом вводили взвесь цеолитов из расчета 1 г на 1 кг массы тела. Животным контрольной группы аналогичным образом вводили 1 мл дистиллированной воды. Введение препарата и воды проводили ежедневно с 1 по 19 день беременности.

На 20 день беременности проводили эвтаназию по 13 животных из каждой группы для получения эмбрионального материала.

Цеолиты в дозе 1/24 от максимально вводимой не оказывали существенного влияния на количество желтых тел в яичниках, число желтых тел в яичниках второй и первой группы составляло по 12,4±0,3 и 12,45±0,25 соответственно. Количество мест имплантации в опытной и контрольной группах также было одинаковым. Количество живых плодов в первой и второй группах составляло 10,24±0,15 и 10,25±0,17 соответственно.

Предимплантационная гибель плодов в группе, получавшей препарат, была меньше на 0,1%, чем в контрольной. В то время как постимплантационная гибель плодов в опытной группе по сравнению с контролем увеличилась - на 1,1%.

Краниокаудальный размер плодов у белых крыс в обоих группах был одинаковым и составил 3,16±0,07 и 3,14±0,05 см соответственно.

Выживаемость плодов у опытной группы животных была выше на 0,2%, чем в группе биологического контроля. Масса плодов между второй и первой группой не имела значительных отклонений и была равна 3,30±0,08 и 3,31±0,09 г соответственно.

При внешнем осмотре извлеченных из матки плодов обоих групп животных морфологических изменений не выявили.

Продолжительность беременности крыс во второй и первой группе практически была одинаковой и составила 23,0±0,2 и 22,8±0,2 дней соответственно, что аналогично контрольной группе.

Количество мертворожденных крыс не отличалось между группами подопытных животных, и составляло для обеих групп по 2,6.

Из приведенных данных следует, что продолжительность беременности, количество родившихся крысят, количество мертворожденных, сроки отлипания ушей, опушения, прозрения и прорезывания резцов опытной группы животных не отличается от таковых биологического контроля. Не наблюдаются различия и в постнатальной смертности.

Таким образом, из результатов токсикологических исследований следует, что цеолитсодержащая порода Майнского месторождения Ульяновской области в соответствии с классификацией химических соединений по ГОСТу 12.1.007.76 относится к 4 классу. Препарат не обладает кумулятивным, аллергизирующим, эмбриотоксическим, тератогенным действием, не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки. Биологическая проба, проведенная на белых крысах и поросятах показала, что скармливание животным в течение 6 и 3 мес кормов, содержащих цеолиты, не только не оказывает побочного действия на организм животных, но и способствует увеличению массы тела крыс. Учитывая большой набор макро- и микроэлементов, а также высокие сорбционные свойства цеолитов сочли необходимым проведение научно-производственных опытов с использованием их в качестве кормовых добавок на сельскохозяйственных животных, оценки их влияния на обмен веществ и продуктивность животных и качество продуктов животноводства.

  1   2   3


База данных защищена авторским правом ©zubstom.ru 2015
обратиться к администрации

    Главная страница