Метод кросс-поляризационной оптической когерентной томографии для прижизненной оценки состояния коллагеновых волокон слизистых оболочек человека



страница1/4
Дата29.06.2015
Размер0,49 Mb.
  1   2   3   4


на правах рукописи




КИСЕЛЕВА ЕЛЕНА БОРИСОВНА

МЕТОД КРОСС-ПОЛЯРИЗАЦИОННОЙ ОПТИЧЕСКОЙ КОГЕРЕНТНОЙ ТОМОГРАФИИ ДЛЯ ПРИЖИЗНЕННОЙ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ КОЛЛАГЕНОВЫХ ВОЛОКОН

СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧЕК ЧЕЛОВЕКА

Специальность 03.01.02 - биофизика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

кандидата биологических наук

Москва – 2013

Работа выполнена в научной лаборатории изучения оптической структуры биотканей Научно-исследовательского института Биомедицинских технологий при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Нижегородской государственной медицинской академии» Минздрава России. Клинический материал получен в Нижегородской областной клинической больнице им. Н.А. Семашко, а также в клинике ортопедической стоматологии стоматологического факультета северо-западного Государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

зам. директора по науке НИИ БМТ НижГМА



ГЛАДКОВА Наталья Дорофеевна









Официальные оппоненты:
















Ведущее учреждение:



Защита диссертации состоится ……………… в … часов …. мин. на заседании диссертационного совета Д 501.001.96 при Московском государственном университете имени М.В. Ломоносова по адресу: 119234, Россия, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 12, Биологический факультет МГУ, аудитория .

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Московского Государственного университета им. М.В. Ломоносова.

Автореферат разослан «___» _______________ 2013 г.

Учёный секретарь

диссертационного совета,

доктор биологических наук

Страховская М.Г.


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Вопросам изучения структурной организации внеклеточного матрикса соединительной ткани и его ремоделированию в последние годы уделяется пристальное внимание (Sellaro T.L., 1999; Игнатьева Н.Ю., 2011). Методами оптической визуализации, а также калориметрическими методами доказано, что пространственная и структурная организация коллагеновых волокон, преобладающего компонента внеклеточного матрикса соединительной ткани, неизбежно повреждается в ходе различных патологических процессов – воспаления, неоплазии, а также при воздействии ряда внешних факторов: ионизирующего излучения при лучевой терапии, интенсивного лазерного излучения при проведении операций и лазерной коррекции (Fratzl P., 2008; Овчинникова О.А., 2008). Данные о характере и степени повреждений коллагеновой матрицы могут быть использованы в клинике для дифференциальной диагностики заболеваний, выявления ранних неопластических процессов, определения ответа биоткани на проводимое лечение, определения качества трансплантатов на основе коллагена (Мальцев А.В., 2011; Шангина О.Р., 2007). Однако инвазивность, дороговизна и отсутствие коммерческих устройств для оценки структуры соединительной ткани (поляризационная микроскопия, иммуногистохимия, многофотонная микроскопия в режиме генерации второй гармоники, когерентная анти-стоксовая рамановская спектроскопия), сильно ограничивают широкое использование этих методов в клинической практике.

С этой точки зрения востребованными являются неинвазивные, высокоразрешаюшие и доступные методы изучения внутренней структуры тканей, в частности, оптическая когерентная томография (ОКТ), в настоящее время признанная мировым сообществом как инновационная медицинская диагностическая технология. Метод ОКТ обеспечивает формирование двух- и трехмерных изображений структуры тканей в режиме реального времени на глубинах до 1-2 мм с микронным разрешением (до единиц мкм). Технология основана на низкокогерентной интерферометрии в инфракрасном диапазоне длин волн (700-1300 нм), получаемые изображения определяются распределением поля обратно рассеянной зондирующей волны и характеризуют эффективность рассеяния на оптических неоднородностях биоткани, обусловленных составом и строением ее слоев и отдельных структур (Huang D., 1991; Tearney G.J., 1997).

ОКТ имеет большие преимущества как диагностический метод, позволяющий формировать изображения слизистых оболочек1 внутренних органов с помощью эндоскопических зондов (Гладкова Н.Д., 2007; Brezinski M.E., 2013). В практическом плане модификации ОКТ, использующие поляризованное зондирующее излучение, оказались более информативными в обнаружении отклонений от нормы, где о характере патологии, в том числе, можно судить по изменению структуры коллагеновых волокон. Так, поляризационно-чувствительная ОКТ (ПЧ ОКТ), способна детектировать нарушение нативной структурной организации коллагеновых волокон в сухожилиях (Bagnaninchi P. O., 2010; Rashidifard C., 2012), связках (Martin S.D., 2003; Kim, 2010), межпозвоночных дисках (Matcher S.J., 2004; Beaudette K., 2012), суставных хрящах (Drexler W., 2001; de Boer J.F., 2002; Adams S.B., 2006), дерме (Pierce M.C., 2004; Srinivas S.M., 2004), тканях глаза, костной и зубной тканях. В ПЧ ОКТ в дополнение к традиционному ОКТ-изображению строится карта фазовой задержки (de Boer J.F., 1997; Nadkarni S.K., 2007), скорость изменения которой с глубиной характеризует ориентацию, степень структурной организации коллагена на волоконном и тканевом уровнях (Everett M.J., 1998; de Boer J.F., 2002; Liu B., 2006).

Кросс-поляризационная ОКТ (КП ОКТ) – модификация ПЧ ОКТ, формирующая одновременно два изображения путем раздельной регистрации рассеянного излучения в двух каналах, параллельном и перпендикулярном поляризации зондирующего излучения (изображения в исходной и ортогональной поляризациях, соответственно). В отличие от ПЧ ОКТ, где акцент делается на поиске двулучепреломляющих свойств исследуемой ткани, проявляющихся в виде паттернов на картах фазовой задержки, КП ОКТ визуализирует случайную деполяризацию излучения2 как за счёт двулучепреломления, так и за счет рассеяния в исследуемой биоткани (Schmitt J.M., 1998). Под КП ОКТ сигналом понимается пара рассеянных от объекта сигналов в исходную и ортогональную поляризации, в то время как ОКТ-сигнал – рассеянный от объекта сигнал в одну из поляризаций.

Метод КП ОКТ приборно реализован нижегородской научной группой ОКТ, он развивается и получает широкое клиническое применение в эндоскопии (Feldchtein F., 1998; Гладкова Н.Д., 2007). Сравнение изображений обратного рассеяния в исходной и ортогональной поляризациях оказалось более информативным по сравнению с анализом карт фазовой задержки для биотканей со слабым двулучепреломлением, в которых организованные коллагеновые волокна не имеют регулярной структуры по глубине (анизотропные ткани, к которым могут быть отнесены слизистые оболочки внутренних органов) (Gladkova N., 2013а, 2013б). Работ по исследованию деполяризующих свойств коллагеновых волокон слизистых оболочек для оценки функционального состояния ткани нам найти не удалось. Однако неуклонно растущий интерес к поиску специфических маркеров воспалительных и неопластических процессов в слизистых оболочках убеждает в актуальности данного исследования (Pfister C., 1999; Konety B.R., 2001; Masters J. R., 2003).

Особый интерес представляет количественная обработка ОКТ-изображений. Известные коммерческие ОКТ приборы (офтальмологические и интраваскулярные) позволяют определять размеры визуализируемых структур, исследовательские ПЧ ОКТ приборы – рассчитывать двулучепреломление ткани, единственный коммерчески реализованный КП ОКТ прибор (ОКТ 1300У, «Биомедтех», ИПФ РАН, Н.Новгород) позволяет делать и то, и другое. Но главная характеристика коллагенсодержащих тканей, визуализируемая методом КП ОКТ – деполяризация поляризованного зондирующего излучения – до настоящего времени количественно не оценивалась, что мотивирует поиск способов решения этой актуальной задачи.

Сделано несколько попыток визуальной оценки КП ОКТ изображений слизистых оболочек по структуре изображений и яркости ОКТ-сигнала, что не всегда убедительно и весьма субъективно (Кузнецова И., 2012; Стрельцова О. 2013). В связи с этим, очевидно существование важной и неудовлетворенной потребности в объективной оценке деполяризующей способности коллагеновых волокон, основанной на количественной обработке КП ОКТ изображений.


Цель и задачи исследования

Целью данной работы явилось изучение и количественная оценка деполяризующих свойств коллагеновых волокон соединительнотканной стромы слизистых оболочек человека методом кросс-поляризационной ОКТ в норме и при различных патофизиологических состояниях.

Исходя из поставленной цели, были сформулированы следующие основные задачи:



  1. Анализ структуры КП ОКТ изображений тканей с высокой плотностью коллагеновых волокон при двулучепреломлении и деполяризации исходно поляризованного зондирующего излучения.

  2. Анализ зависимости ОКТ-сигнала в ортогональной поляризации от структурной организации коллагеновых волокон при патофизиологических процессах.

  3. Поиск характеристик ОКТ-сигнала, чувствительных к изменению нативной структуры и пространственной организации коллагеновых волокон слизистых оболочек.

  4. Применение найденных характеристик (показателей) как критериев степени повреждения коллагеновых волокон при клинически значимых патологических процессах для диагностических целей.


Научная новизна результатов

В работе впервые:



  1. Проведены параллельные сопоставления изображений соединительнотканной стромы слизистых оболочек человека, полученные различными видами оптической микроскопии в условиях in vitro и демонстрирующие содержание и структуру коллагеновых волокон, и КП ОКТ изображений, позволяющих оценить структуру этих же объектов в условиях in vivo.

  2. Показано, что средняя яркость коллагеновых волокон на гистологических препаратах слизистых оболочек, оцененная методом поляризационной микроскопии, высоко коррелирует с ОКТ-сигналом в ортогональной поляризации (r=0.84, p=0.0001).

  3. Доказано, что метод КП ОКТ прижизненно позволяет различать состояние коллагеновых волокон слизистых оболочек (по визуальной оценке ОКТ-сигнала в ортогональной поляризации). Установлено, что дезорганизация (расщепление) коллагеновых волокон, возникающая в ходе острого воспаления и неоплазии, характеризуется более низким ОКТ-сигналом в ортогональной поляризации по сравнению с сигналом от коллагеновых волокон в норме. Состояния коллагеновых волокон при фиброзе соединительной ткани и образовании соединительнотканного рубца характеризуются более высоким ОКТ-сигналом в ортогональной поляризации по сравнению с нормой.

  4. Разработаны несколько способов количественной оценки ОКТ-сигнала в ортогональной поляризации, характеризующие состояние коллагеновых волокон: относительная яркость ОКТ-сигнала (ЯР), относительное среднеквадратичное отклонение яркости ОКТ-сигнала (СКО) и интегральный фактор деполяризации (ИФД). Показано, что диагностическая точность ИФД выше по сравнению с другими показателями для разграничения вариантов доброкачественных состояний между собой (86 и 79% ИФД против 65 и 73% ЯР и 65 и 54% СКО), доброкачественных и злокачественных состояний слизистой оболочки мочевого пузыря (97 и 72% ИФД против 94 и 50% ЯР и 94 и 72% СКО). ИФД также может применяться для мониторинга ремоделирования соединительнотканного матрикса в ходе лучевого повреждения.


Практическая значимость работы заключается в возможности использования количественной оценки КП ОКТ сигнала для оперативной диагностики заболеваний в клинической практике. Полученные доверительные интервалы значений ИФД клинически значимых патологических состояний слизистых оболочек могут быть применены для детального слежения за изменением пространственной ориентации и плотности коллагеновых волокон внеклеточного матрикса при развитии патологии; мониторинге регенеративных процессов; ответе ткани на проводимое лечение, а также для изучения поляризационных свойств коллагеновых матриц при их моделировании; создании скафолдов, гелей, имплантатов; изучении их биосовместимости и биодеградируемости; при конструировании биоактивных инженерных каркасов, обладающих поляризационными свойствами.

Основные выводы и результаты работы могут быть использованы в учебном процессе при разработке соответствующих спецкурсов.


Научная новизна и практическая значимость исследования подтверждены патентами и заявкой на патент:

1. Способ прогнозирования степени тяжести реакции слизистой оболочки полости рта и глотки в процессе лучевой или химиолучевой терапии злокачественных новообразований орофарингеальной области. Патент РФ № 2320271. (приоритет от 27.06.2006, опубл. 27.03.2008, бюл. № 9). Гладкова Н.Д., Масленникова А.В., Балалаева И.В., Высельцева Ю.В., Фомина Ю.В., Терентьева А.Б., Баландина (Киселева) Е.Б., Лазарева Е.А., Ермолаева А.М.

2. Способ диагностики побочных эффектов лучевой терапии со стороны мочевого пузыря. Патент РФ № 2393768, (приоритет от 26.11.2008, опубл. 10.07.2010, бюл. № 19). Стрельцова О.С., Тарарова Е.А., Масленникова А.В., Загайнова Е.В., Гладкова Н.Д., Карабут М.М., Киселева Е.Б., Крупин В.Н.

3. Способ диагностики патологии шейки матки. Патент РФ № 2463958, (приоритет от 13.05.2011, опубл. 20.10.2012, бюл. № 29). Кузнецова И.А., Шахова Н.М., Качалина Т.С., Гладкова Н.Д., Киселева Е.Б., Карабут М.М.



4. Способ оценки функционального состояния коллагенсодержащей ткани. Заявка на изобретение № 2013135571, приоритет от 29.07.2013. Киселева Е.Б., Гладкова Н.Д., Сергеева Е.А., Кириллин М.Ю., Губарькова Е.В., Карабут М.М., Балалаева И.В., Стрельцова О.С., Робакидзе Н.С., Масленникова А.В, Кочуева М.В.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

  1. Структура и пространственная организация коллагеновых волокон в слизистых оболочках оказывают влияние на формирование ортогонального ОКТ-изображения: чем лучше структурно организованны коллагеновые волокна на тканевом уровне(их количественное содержание в ткани и плотность расположения), тем сильнее проявляются их деполяризующие свойства и тем выше ОКТ-сигнал в ортогональной поляризации.

  2. Предложены количественные показатели деполяризующих свойств соединительнотканной стромы слизистых оболочек: относительная яркость ОКТ-сигнала – ЯР; среднеквадратичное отклонение яркости ОКТ-сигнала – СКО; интегральный фактор деполяризации – ИФД, потенциально чувствительные для оценки ОКТ-сигнала в ортогональной поляризации. Проведено сравнение их диагностической эффективности при различных патофизиологических состояниях, установившее преимущества ИФД.

  3. ИФД использован для неинвазивной оценки функционального состояния коллагеновых волокон слизистых оболочек. Для слизистой оболочки полости рта в области щеки: величина ИФД в норме равна 0,13±0,02, при остром воспалении – 0,06±0,02, при диффузном фиброзе – 0,14±0,03, при образовании фиброзно-рубцовой ткани – 0,17±0,04. Для слизистой оболочки мочевого пузыря: величина ИФД в норме равна 0,14±0,02, при остром воспалении – 0,08±0,03, при диффузном фиброзе – 0,19±0,03, при образовании рубцовой ткани – 0,27±0,05, при тяжелой дисплазии эпителия (cancer in situ) – 0,05±0,02, при раке (плоская опухоль) с началом инвазивного роста – 0,03±0,01, а при раке на постоперационном рубце – 0,09±0,05.

4. Найденные доверительные интервалы ИФД использованы для дифференциальной диагностики следующих патологических состояний: − болезни Крона и язвенного колита (показано на примере слизистой оболочки щеки); – стадии острого воспаления (доброкачественное состояние), тяжелой дисплазии и плоского поверхностного рака с началом инвазии в соединительно тканную строму (злокачественные состояния) (показано на примере слизистой оболочки мочевого пузыря); – рецидива эпителиального рака на постоперационном рубце и рубца (показано на примере слизистой оболочки мочевого пузыря). ИФД применен для неинвазивного мониторинга состояния соединительнотканной стромы при лучевом повреждении.
Апробация работы. Основные результаты и положения диссертации были представлены и обсуждены на Международных конференциях (8 докладов) и Российских конференциях (5 докладов): VIII научной сессии студентов и молодых ученых «Современное решение актуальных научных проблем в медицине» (г. Н. Новгород, 2009), XII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей "Фундаментальная наука и клиническая медицина" (г. Санкт-Петербург, 2009), SPIE Photonics Europe (Бельгия, 2010), 14-ой международной школе-конференции молодых ученых (г. Пущино, 2010), V Троицкой конференции «Медицинская физика и инновации в медицине» (г. Троицк, 2012), IV Съезде биофизиков России (г. Н. Новгород, 2012), Всероссийской научной сессии молодых ученых и студентов с международным участием "Современные решения актуальных научных проблем в медицине" (г. Н. Новгород, 2013), XVII, XX международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (г. Москва, МГУ, 2013), 6th International Graduate Summer School Biophotonics '13 (Ven, Sweden, 2013), International Symposium «Topical Problems of Biophotonics» (2007, 2009, 2011, 2013).
Публикации. По материалам диссертации опубликована 31 печатная работа, из них 18 в международных и российских рецензируемых журналах, 5 глав в книгах (3 на английском языке), 13 публикаций в сборниках материалов конференций. Получено 3 патента на изобретения, подана 1 заявка на изобретение (2013).
Сокращения, принятые в работе. КВ – коллагеновые волокна; ОКТ – оптическая когерентная томография; КП ОКТ – кросс-поляризационная оптическая когерентная томография; ЯР – относительная яркость ОКТ-сигнала; ИФД – интегральный фактор деполяризации; СКО – относительное среднеквадратичное отклонение яркости ОКТ-сигнала; ГЭ – гематоксилин-эозин; ПСК – пикросириус красный; ГВГ – генерация второй гармоники.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 4 подглав результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 180 страницах, включает 15 таблиц и 40 рисунков. Список литературы содержит 244 источника, из них 197 зарубежных.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Рассмотрено строение коллагеновых волокон как оптически анизотропных компонентов соединительных тканей, обладающих кристаллоподобной структурой. Подробно обсуждаются основные явления, наблюдаемые при распространении поляризованного света вглубь соединительной ткани и его обратном рассеянии: двулучепреломление и деполяризация света коллагеновыми волокнами. Описаны основные оптические методы изучения коллагеновых волокон в тканях – поляризационная микроскопия, многофотонная микроскопия на основе генерации второй гармоники (ГВГ), поляризационные модификации оптической когерентной томографии (ОКТ). Детально описан принцип метода кросс-поляризационной ОКТ (КП ОКТ). Рассмотрены структурные изменения соединительнотканной стромы слизистых оболочек в целом и коллагеновых волокон в частности под влиянием ряда патологических процессов: воспаления и его исходов, неоплазии, а также лучевого повреждения. Проведен анализ существующих методов обработки ОКТ-изображений.


ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования в эксперименте служили: сухожилие сгибателей пальцев стопы человека как классический объект для демонстрации двулучепреломления коллагеновых волокон; слизистая оболочка десны кролика как объект для демонстрации исчезновения деполяризующих свойств коллагеновых волокон нормальной соединительнотканной стромы после их температурной коагуляции при точечном лазерном воздействии.

Объектами исследования для решения клинических задач явились слизистая оболочка полости рта человека и слизистая оболочка мочевого пузыря человека в ходе прижизненного эндоскопического КП ОКТ наблюдения, а также удаленные при оперативных вмешательствах и биопсии фрагменты слизистых оболочек для проведения гистологических исследований. Нормальные ткани изучены post mortem.

Сформированы 4 группы КП ОКТ и гистологических изображений слизистой оболочки щеки: 1 группа – норма, n=20: post mortem (10 КП ОКТ и 10 – гистологических изображений), здоровые добровольцы (10 КП ОКТ изображений); 2 группа – острое воспаление, n=8: больные с красным плоским лишаем и афтозным стоматитом, исследовались области изъязвления; 3 группа – хроническое воспаление с образованием участков фиброзной ткани, n=10: больные язвенным колитом с отсутствием клинических признаков стоматита; 4 группа – хроническое воспаление с образованием фиброзно-рубцовой ткани, n=16: больные с верифицированным диагнозом болезни Крона, которые на момент обследования не имели клинических признаков стоматита.

Сформированы 7 групп КП ОКТ и гистологических изображений слизистой оболочки мочевого пузыря: 1 группа – норма, n=10: post mortem (10 гистологических и 5 КП ОКТ изображений), здоровые добровольцы (5 КП ОКТ изображений); 2 группа – острое воспаление, n=14: больные с острым первичным циститом или резким обострением хронического цистита; 3 группа – хроническое воспаление с образованием участков фиброзной ткани, n=18: больные с хроническим циститом длительностью 1-15 лет; 4 группа – хроническое воспаление с образованием рубцовой ткани, n=18: больные с постоперационным рубцом без признаков воспаления и без подозрения на рецидив рака на рубце; 5 группа – тяжелая дисплазия эпителия, n=8; 6 группа – плоский рак в начальной стадии инвазивного роста, n=14; 7 группа – рецидив рак на постоперационном рубце, n=14.

Основные методы исследования. Методом КП ОКТ изучены поляризационные свойства биотканей in vivo. Использован КП ОКТ прибор «ОКТ 1300-У» (ИПФ РАН, г. Нижний Новгород). Технические характеристики: рабочая длина волны 1300 нм, мощность 3 мВт, пространственное разрешение по глубине 15-20 мкм, поперечное разрешение 25 мкм, сканирование по глубине до 1,5 мм. Внешний диаметр волоконно-оптического зонда 2,7 мм. Скорость получения изображения 1 кадр в 2 секунды. Размер КП ОКТ изображения 1,8х2,6 мм (400х512 пикселей).

КП ОКТ изображения сопоставлялись с морфологическими изображениями, полученными методами микроскопии. Исследовались гистологические препараты тех же зон методами светлопольной (окраска гематоксилином и эозином - ГЭ) и поляризационной микроскопии (окраска пикросириусом красным - ПСК); фрагменты удаленных тканей и криосрезы – методом многофотонной микроскопии в режиме ГВГ. Методом КП ОКТ исследовано 256 зон; получено и проанализировано 256 КП ОКТ изображений. Проанализировано 310 гистологических препаратов (в том числе криосрезов).



Формирование микроповреждений проводилось с использованием лазерной системы компании «Dental Photonics Inc» на основе диодного лазера с длиной волны 980 нм, генерирующего излучение мощностью до 20 Вт. Каждая лазерная колонка создавалась при контакте наконечника диаметром 400 мкм с тканью десны при длительности экспозиции 150 мс.

Мониторинг состояния коллагеновых волокон стенки мочевого пузыря в течение курса лучевой терапии проводился 1 раз в неделю, начиная с первого дня лечения. В первый день КП ОКТ исследование совмещали с цистоскопией. Далее (чтобы минимизировать травматизацию уретры и мочевого пузыря) КП ОКТ выполняли без цистоскопа. Положение зонда контролировали методом УЗИ с помощью вагинального датчика аппарата PHILIPS HD 11 XE. Курсовая доза облучения составляла 50-60 Гр, однократная доза – 4 Гр. Варианты лучевой терапии: расщепленный курс, сочетанная лучевая терапия по радикальной программе, послеоперационная лучевая терапия.

Количественная обработка 202 КП ОКТ изображений слизистой оболочки мочевого пузыря и 54 КП ОКТ изображений слизистой оболочки щеки проведена с помощью разработанных критериев (раздел 3.3).

Количественная обработка цифровых изображений 44 гистологических препаратов слизистой оболочки щеки, окрашенных ПСК и сфотографированных в поляризованном свете при одинаковых условиях, проводилась по стандартной методике, описанной Giattina S. D. с соавторами (Giattina S.D., 2006), в программе Photoshop 7.0.1. путем измерения средней яркости по выделяемой области интереса (канал L цветовой палитры Lab) с последующим нормированием значений.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием встроенного пакета статистического анализа MS Excel 2003 и GraphPad Prism 6. В работе проводилось определение средних значений (М) измеряемых величин и стандартных отклонений среднего (±s). Достоверность различий между группами рассчитывалась с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Для выявления корреляции между яркостью коллагеновых волокон на гистологических препаратах, окрашенных пикросириусом красным, и ИФД использовали коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Во всех случаях статистически значимыми считали различия при уровне значимости р < 0,05.
  1   2   3   4


База данных защищена авторским правом ©zubstom.ru 2015
обратиться к администрации

    Главная страница