Тема 10 Лабораторные методы оценки компетентности иммунной системы Общие сведения. Принципы лабораторных методов



Скачать 368,04 Kb.
страница1/3
Дата29.06.2015
Размер368,04 Kb.
  1   2   3
Тема 10

Лабораторные методы оценки

компетентности иммунной системы

Общие сведения. Принципы лабораторных методов
70% информации, необходимой для постановки диагноза, поступает из результатов лабораторных исследований.

Известно, что наиболее важной задачей клинической лабораторной диагностики является определение дефекта конкретного звена ИС. Основным принципом иммунологической диагностики служит доказательство иммунологической природы патологии (аллергические, аутоиммунные состояния) и выявление недостаточности ИС (ИДС, ИН). Оценка иммунологической реактивности проводится также для характеристики нормального уровня функционирования ИС здорового организма и формирования референтных величин ее показателей (иммунный статус здорового организма).

Ведущими показателями для использования в диагностике патологического состояния иммунологических методов служат клинические признаки, свидетельствующие о нарушениях отдельных уровней ИС (табл. 17).

Таким образом, при большинстве встречающихся патологий существует необходимость лабораторной оценки состояния иммунной системы.

Информативность лабораторных методов исследования может характеризоваться двумя основными критериями: диагностической чувствительностью и диагностической специфичностью (приложение 6).

Диагностическая чувствительность метода (ДЧ): частота положительных результатов искомого параметра среди больных данной патологией. Выражается в процентах: ДЧ = (количество положительных результатов / количество всех больных данной патологией и обследованных данным методом) × 100% (обычно не менее 80%).

Таблица 17

Клинические признаки недостаточности функционирования ИС





Уровень поражения

Клиническая картина

Инфекционные поражения (рецидивирующие и хронические)

Кожа и подкожная клетчатка;
коньюнктивы;
придаточные пазухи, среднее ухо;

кандидоз кожи, пиодермия, фурункулез, абсцесс

язвенный, вирусный, бактериальный коньюнктивит

гнойный синусит, отит, мастоидит;


бронхи, легкие, плевра


эндобронхит, пневмония, плевропневмония, плеврит, бронхоэктазы, кандидоз, пневмоцистоз, фиброз;

лимфатические узлы;

гнойный лимфаденит;

слизистая полости рта;

кандидоз, стоматит (язвенный и др.);

ЖКТ;

энтерит, энтероколит, язвенный колит;

кости, суставы;

деформация, боли, синовииты, бурситы;

инфекционные болезни ИС

ВИЧ-инфекция, инфекционный мононуклеоз

Неинфекционные поражения.

Аллергические состояния;

БА, поллиноз, атопический дерматит, отек Квинке и др.

Аутоиммунные заболевания;

РА, СКВ, ХАГ, АФЛ синдром и др.

Онкологические

заболевания

лимфатических узлов

миндалин


тимуса

лимфомы, лимфосаркомы, лимфолейкоз, лимфогранулематоз

гипоплазия

гипоплазия

гипоплазия




Диагностическая специфичность метода (ДС): частота отрицательных результатов обследованных данным методом здоровых лиц. Выражается в процентах: ДС = (количество отрицательных результатов при обследовании здоровых лиц/ количество обследованных здоровых лиц) × 100% (обычно не менее 80%).

В лабораторной иммунологии для разработки диагностических тест-систем используют как поликлональные, так и моноклональные антитела.

Для оценки метода используется комплекс критериев надежности, о котором будет подробно изложено в теме 11.

Реакция между антигеном и антителом – это основной принцип всех иммунологических методов. Ин витро в комплексе «АГ+АТ» может быть определено как антитело, так и антиген. При определении антитела биоматериал должен содержать связывающий антиген, при определении антигена – содержать связывающие антитела. Образовавшийся комплекс «антиген-антитело» определяется визуально или измеряется на приборе. Способ измерения зависит от свойств антигена и антитела.

В зависимости от того, в какой среде и условиях происходит определение комплекса «АГ+АТ» различают: гомогенный, гетерогенный и диффузный методы исследования.

Гомогенный метод. В гомогенном методе реагенты и исследуемый образец смешиваются и сигнал от реакции связывания «АГ+АТ» учитывается определенным техническим устройством. Гомогенные методы не включают твердой фазы, дают быстрые результаты, так как не нуждаются в разделении реакционных этапов (реакция агглютинации, реакция связывания комплемента и др.). Методы могут быть усилены введением «носителей» компонентов реакции (эритроциты, латекс и др.).

Гетерогенный метод. При этом методе один из реагентов – антитело или антиген – фиксируется на твердой фазе (полистирол, латексные, парамагнитные частицы и др.). Для визуализации реакции «Агт» и ее учета в смесь вводится метка, связанная с АТ или с АГ. Реакция включает этапы отмывки смеси от несвязавшихся реагентов. Метод используется при определении низких концентраций компонентов. Существует в вариантах: неконкурентный и конкурентный. Подробнее метод будет описан в соответствующем разделе темы.

Диффузионный метод (метод электрофореза, иммуноэлектрофореза, радиальной иммунодиффузии и др.). Реакция происходит в геле. В иммунодиффузии растворимые антигены и растворимые антитела, связываясь, образуют преципитат. При проведении реакции очень важное значение имеет соотношение между антигеном и антителом. Пассивная диффузия компонентов реакции может быть усилена использованием различных электрофоретических процедур.

Прежде чем начать описание конкретных методов лабораторной клинической иммунологии, напомним об основных физических явлениях, лежащих в основе принципов работы приборов, используемых для автоматизированного учета реакции «антиген-антитело»:



Фотометрия (греч. phos – свет) основана на учете поглощения света присутствующим комплексом «антиген-антитело». Абсорбцию света измеряют приборы – фотометры.

Турбидиметрия/нефелометрия (англ. turbidy – мутный, греч. nephele – облако) – разновидность фотометрии. Метод основан на учете рассеивания света, проходящего через раствор, содержащий комплекс «антиген-антитело». Угол рассеивания, а значит и степень рассеивания, зависят от концентрации (плотности) комплекса «АГ+АТ».

Принцип используется в приборах: нефелометрах, автоматизированных биохимических и иммунологических анализаторах ( Хитачи, ADVIA и др.).



Флюоресценция (от названия минерала флюорита, у которого впервые обнаружено свечение, + лат. escentia – слабое действие) – слабое свечение веществ после освещения их светом. При флюоресценции длина волны направленного света меньше длины волны эмиссии «послесвечения». Количество фотонов рассчитывается фотометром и зависит от концентрации исследуемого вещества в пробе. Принцип включен в работу многих высокочувствительных приборов-иммунофлюориметров.

Хемилюминесценция (хеми – химический, лат. lu-men – свет, т.е. свечение, сопровождающее химические реакции). При образовании комплекса «АГ+АТ», что аналогично химической реакции (окисление мембранных компонентов и т.д.), происходит свечение, выделяются кванты света. Учитывается реакция при помощи хемилюминометров, в которые вводятся дополнительные устройства для усиления свечения. В лабораторной иммунологии широко испльзуются иммунохемилюминометры с высокой степенью чувствительности и специфичности (Кентавр, Аксим, хемилюминометр 1251 для оценки фагоцитоза и др.).

Радиоактивность. Радиоактивные изотопы (НЗ тимидин, 125I, 131I и др.) используются в качестве метки достаточно широко. Изотопы излучают энергию в виде - или -лучей, которые могут улавливаться соответствующими счетчиками. Концентрация веществ («АГ+АТ») определяется по интенсивности излучения - или -лучей (например, в реакции бластной трансформации лимфоциты метятся НЗ тимидином, который улавливается -счетчиком).

В последнее время для получения информации о персестирующих вирусно-бактериальных инфекциях, тестирования факторов патогенности микроорганизмов, его вирулентности, исследования апоптоза и т.д. используется метод ДНК-диагностики. включающий два основных принципа: ДНК-гибридизация и полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Принцип методов: создание гибридомной цепи ДНК, многократное копирование определенного фрагмента ДНК с помощью фермента ДНК-полимеразы. Образуется огромное количество копий. Это позволяет из небольшого количества исходного материала получить достаточное количество копий для проведения учета реакций.
Подытоживая вышеизложенное, можно заключить:


  1. В основе всех иммунологических методов исследования лежит один общий принцип – реакция «антиген-анти-тело».

  2. Реакция «антиген-антитело» является наиболее чувствительной и специфичной по сравнению с другими методами.

  3. Разнообразие иммунологических методов основано на различиях условий проведения реакций (гомогенный, гетерогенный и др.), различиях в метках (иммунофлюоресценция, иммуноферментныый анализ), на различиях в учете реакций (фотометрия, нефелометрия и др.).

  4. Особую группу методов, используемых в лабораторной клинической иммунологии, составляют методы ДНК-диагностики.

  5. Клиническая ценность лабораторного метода характеризуется рядом параметров, основными из которых являются «Диагностическая чувствительность» и «Диагностическая специфичность».


2. Методы лабораторной оценки

состояния гуморального звена иммунной системы
2.1. Реакция агглютинации (РА)

(лат. agglutinatio – склеивание)

Реакция используется для полуколичественного определения антигенов или антител в образце сыворотки, плазмы и других биологических жидкостях.

  1   2   3


База данных защищена авторским правом ©zubstom.ru 2015
обратиться к администрации

    Главная страница