Республики казахстан



страница5/11
Дата25.08.2015
Размер2,21 Mb.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

Рисунок 2 — Заражение в аллантоисную полость
диаметром около 1 мм. Иглу вводят параллельно

продольной оси на глубину 10-12 мм. После

инъекции вируссодержащего материала иглу извлекают, а отверстие в скорлупе закрывают каплей расплавленного стерильного парафина (рисунок 2).

Второй вариант: эмбрион фиксируют в

горизонтальном положении и делают в центре над воздушной камерой отверстие для выхода воздуха. Отверстие же для самого заражения делают на участке бессосудистой зоны хорионаллантоисной оболочки (ХАО) со стороны зародыша. Иглу вводят на глубину не более 2-3 мм, после инъекции закрывают отверстие парафином.




I
/ ~ -

' / I If скорлупе над воздушной камерой вводят иглу с

/ ij затупленным концом по направлению к зародышу.


При правильном введении тело зародыша двигается в направлении передвижения иглы. Открытый способ: эмбрион фиксируют

горизонтально и срезают скорлупу над воздушной


полость проводят закрытым и открытым способом (рисунок 3). Таким образом, культивируют вирус гриппа, НБ, ринопневмонии лошадей. Закрытый способ: заражение проводят в затемненном боксе, фиксируя эмбрион на овоскопе в горизонтальном положении зародышем вверх. Через отверстие в

браншами продавливают ХАО по направлению к зародышу и захватывают амниотическую оболочку, подтягивая ее к отверстию. Удерживая левой рукой пинцет с фиксированной оболочкой амниона вводят вируссодержащий материал. После инъекции все оболочки опускают, отверстие закрывают лейкопластырем.



Заражение в желточный мешок. Этот метод используют для культивирования хламидий, вируса болезни Марека, ринопневмонии лошадей, катаральной лихорадки овец. Также существует несколько вариантов. В первом варианте эмбрион фиксируют вертикально тупым концом вверх. Делают отверстие над центром воздушной камеры и вводят иглу на глубину 3,5-4,0 см под углом 45°С в направлении, противоположном от зародыша (рисунок 4). Второй вариант заключается в том, что эмбрион фиксируют горизонтально, при этом зародыш находится внизу, а желток - над ним. Через отверстие в скорлупе в желток, который находится вверху, вводят инфицированный материал.

Заражение в тело зародыша. Заражение в тело зародыша проводят также, как в амнион, закрытым и открытым способом. Разница в том, что подтягивают тело зародыша и используют острую иглу, проследив подчинение зародыша движению иглы. Материал можно вводить в головной мозг или определенные участки тела. При этом может быть значительный процент неспецифической гибели эмбрионов.




Рисунок 4 - Заражение в желточный мешок
Заражение на хорион-аллантоисную оболочку. Часто этот метод используют для культивирования эпителиотропных и пантропных вирусов оспы, инфекционного ларинготрахеита птиц, чумы плотоядных, болезни Ауески. Такое заражение также выполняют в разных вариантах. В первом варианте для заражения через естественную воздушную камеру эмбрион помещают вертикально тупым концом вверх и в скорлупе против центра воздушной камеры вырезают круглое окно диаметром 15

  1. мм. Через него пинцетом снимают подскорлупную оболочку и на обнажившийся участок ХАО наносят вируссодержащий материал. Отверстие закрывают лейкопластырем или покровным стеклом с использованием расплавленного парафина. Заражение через искусственную воздушную камеру применяют чаще первого, поскольку обеспечивается контакт вируссодержащего материала с большей поверхностью ХАО, и поэтому больше накапливается вирус. Отверстие закрывают лейкопластырем или покровным стеклом с использованием расплавленного парафина (рисунок 5).

I f


Рисунок 5 - Заражение на ХАО через естественную и искусственную

воздушную камеру
tr

Заражение в кровеносные сосуды ХАО. При овоскопировании 1113-дневных эмбрионов отмечают крупный кровеносный сосуд. По его ходу удаляют участок скорлупы, наносят 1-2 капли спирта, что делает на некоторое время подскорлупную оболочку прозрачной. Под контролем глаза на овоскопе иглу вводят в сосуд, что подтверждается его подвижностью при небольших боковых движениях иглы. Обнаженный участок подскорлупной оболочки закрывают кусочком лейкопластыря.

Можно материал в сосуды ввести и несколько отличающимся способом: срезают скорлупу над воздушной камерой, подскорлупную оболочку смачивают спиртом и в ставшие видными сосуды ХАО вводят материал. Отверстие закрывают кусочком стерильного лейкопластыря.

Описанные технические приемы экспериментального заражения куриных эмбрионов не являются единственными, а имеют различные варианты.

Перед дальнейшей инкубацией на скорлупе зараженных любым методом куриных эмбрионов простым (графитным) карандашом пишут, чем заражен эмбрион и когда, а если нужно, то и другие сведения. Зараженные куриные эмбрионы помещают в термостат для дальнейшей инкубации, в процессе которой происходит репродукция внесенных вирусов и их накопление в соответствующих структурах. Температура инкубации эмбрионов варьирует от 33 до 38°С в зависимости от свойств вируса, которым проведено заражение.

За эмбрионами ведут постоянное наблюдение, просматривают на овоскопе, отбирая павшие.

Гибель эмбрионов впервые 24 часа после заражения чаще всего обусловлена размножением грибов, бактериальной микрофлоры, внесенных в эмбрион вместе с инокулятом, или травмированием при заражении. Эта гибель считается неспецифической. В более поздние сроки эмбрионы гибнут в результате, как правило, размножения в эмбрионах вируса. Обнаружив погибшие эмбрионы, их сразу же переносят в холодильник с температурой 4°С. Такие условия, с одной стороны, способствуют сохранению активности накопившегося в эмбрионе вируса, с другой - уплотнению тканей и запустению сосудов, что значительно облегчает последующее вскрытие.

Эмбрионы инкубируют до момента максимального накопления вируса. Для каждого вируса и даже штамма этот срок является определенным и варьирует в пределах от 2 до 7-8 суток. Так, для вируса ньюкаслской болезни штамма Н он составляет 2-3 дня, для того же вируса штамма В - 5 дней, для вируса инфекционного ларинготрахеита птиц - 5 дней и т. д. Затем все эмбрионы умерщвляют охлаждением при 4°С в течение не менее 3-4 часов и вскрывают.

Абсолютная эффективность посева - процент единичных клеток, которые после внесения в систему для выращивания образуют колонии.

Относительная эффективность посева - процент посеянных клеток, образующих колонии по отношению к контролю, в котором за 100% принимается абсолютная эффективность посева.

Фибробласты - клетки веретенообразной или нерегулярной формы, образующие волокна.

Фибробластоподобные клетки - клетки неизвестного происхождения веретенообразной или нерегулярной формы.

Эпителиальные клетки - тесно лежащие рядом друг с другом клетки, которые образуют слой с очень маленьким количеством межклеточного вещества.

Изменение культуры - постоянное изменение собственных свойств, так изменения морфологические, хромосомальные, чувствительности к вирусу, потребностей питания, способности роста, малигнизации и т.д.

Первичные культуры - это культуры из клеток, органов и тканей, взятых непосредственно из убитого организма. Для получения культур клеток могут быть использованы самые разнообразные ткани: как эмбрионов, так и взрослых животных. Выбор ткани зависит главным образом от свойств, предполагаемого вирусного агента в исследуемом материале. Эмбриональные ткани стерильны, и чтобы получить нужный материал, достаточно проводить работу в асептических условиях. Они могут быть взяты из различных источников: ткани цыпленка,

лабораторных и естественно восприимчивых животных. В диагностической работе чаще используют ткани эмбрионов коров, свиней, овец, реже коз, кроликов, собак. Эмбрион кур чаще используют в возрасте 7-14 дней. Эмбрионы крупных млекопитающих получают обычно на мясокомбинате или бойне при вынужденном или случайном убое беременных животных. Наиболее широко в диагностических исследованиях применяют культуры, полученные из почек телят, тестикул бычков, а также почек и тестикул ягнят и поросят. Материал, предназначенный для получения культур, необходимо обрабатывать и культивировать немедленно после получения. Если это невозможно, допускается кратковременное хранение ткани до применения. Однако выход жизнеспособных клеток после хранения резко снижается.



Культуры переживающих эксплантатов ткани. Метод культивирования переживающих эксплантатов - один из наиболее простых, используемых для культивирования вирусов. Метод предложил Мейтландами в 1928 г. для культивирования вируса осповакцины на кусочках куриной почечной ткани, помещенной в раствор Тироде с куриной сывороткой (2:1). Используют для получения ящурной вакцины, берут кусочки ткани языка (метод Френкеля).

Культуры растущих (фиксированных) эксплантатов тканей. В основу приготовления культур фиксированных кусочков положен метод Карреля-Берроуза (1910) - культивирование кусочков ткани,

фиксированных в сгустке плазмы. Этим методом можно выращивать клетки любых тканей. Берут 5-6 кусочков ткани и добавляют куриный экстракт, затем заливают питательной средой. К 6-му дню вокруг кусочков образуются кусочки молодых клеток. Недостатком является, что через 4-5 дней культура клеток сползает со стекла (необходима подкормка). В настоящее время используют для культивирования респираторных вирусов.



Монослойные культуры клеток. В настоящее время однослойные культуры клеток растущие на стекле нашли широкое распространение в вирусологических лабораториях и практически вытеснили все остальные методы выращивания клеток вне организма. По сравнению с другими ферментами действие трипсина изучено наиболее детально в связи с широким применением его для массового приготовления однослойных культур в вирусологической практике. В настоящее время наиболее широко применяются два метода трипсинизации: теплый метод многократной экстракции клеток (по Янгеру) и метод холодной трипсинизации (по Бодиану).

Основные этапы получения культур клеток.

  1. Стерильность. От здоровых животных не позднее 1-3 часа берут соответствующие органы (почки, легкие, тестикулы, тимус). Измельчают ткань на кусочки (1-4 мм) и тщательно отмывают от эритроцитов раствором Хенкса.

  2. Заливают теплым раствором трипсина (0,25%) -37-38°С и проводят дробную стерилизацию, через каждые 3-5 минут сливают взвесь клеток в центрифужные пробирки и ставят на холод (4°С), для прекращения действия трипсина, можно доливать сыворотку крови. Продолжают до осветления раствора, т.е. до полного истощения ткани.

  3. Смешанную суспензию клеток, полученную при всех экстракциях, фильтруют через 2-3 слоя стерильной марли или сетку из нержавеющей стали в центрифужные флаконы. Клеточную взвесь центрифугируют при 1000 оборотах 15 минут и трипсин сливают, а осадок клеток ресуспендируют в ростовую среду. После фильтрования определяют концентрацию клеток в суспензии, доводят ее до посевной (400000-1 млн. к/клеток в 1 мл) и разливают в сосуды для культивирования. В пробирки -1 мл до 1,5 мл с покровным стеклом, в матрасы- 10% от объема и помещают в термостат. Холодный метод трипсинизации отличается тем, что перемешивание культуры клеток с трипсином продолжают в течение ночи (12-16 ч) при 4-6°С. Культивирование проводят в термостате при температуре 37-38°С. Клетки прикрепляются к субстрату и начинают делиться. Способность прикрепляться к стеклу клеток называется адгезией. При этом различают следующие стадии: 1) адаптационная фаза-10-16 ч; 2) фаза логарифмического роста - 3-7 дней; 3) стационарная фаза- 7-25 дней; 4) фаза старения, дегенерации и гибели ткани. Обычно монослой образуется на 3-7 день, зависит от ткани, качества среды, рН, видаживотного, концентрации. К первичным культурам клеток относятся (ПЭК-почка эмбрионов коров, ПЭС-почка эмбрионов свиней, ЛЭК- легкие эмбрионов коров, ПТ- почки телят, ТБ-тестикул бычков). Используют субкультуру, которую получают из первичных культур клеток. Для получения субкультур можно использовать центрифужный и безцентрифужные методы. Субкультуру можно получить от 2-6 пассажей. Очень плохо культивируются куриные фибробласты. Субкультуры дают контаминацию, сохраняют чувствительность исходных тканей к вирусу.




Рисунок 6 - Культура клеток почек зеленой мартышки
Перевиваемая культура клеток - это культуры клеток, получаемых из необластических и нормальных тканей животного происхождения, которые способны беспредельно размножаться in vitro, бесконечно перевиваться и, как правило, имеют измененный кариотип по сравнению с исходной культурой (рисунок 6). Некоторые из них обладают онкогенной активностью, это свойство ограничивает использование

перевиваемых культур клеток для культивирования вирусов при производстве вакцин. Наиболее часто используемые перевиваемые культуры клеток (Не1а-клетки получаемые из опухоли женщины, Нер-клетки карциномы гортани, КВ-клетки рака из полости рта, L- нормальная ткань из

фибробластов мыши (1948), СПЭВ-линия, полученная из эмбриона свиней (1958), ППЭС- перевиваемая почка эмбриона свиней, ППТ-перевиваемая почка телят, ТЯ-Чехословацкая линия трахея эмбриона коров, ВНК-21-перевиваемая почка сирийского хомячка, МДВК-перевиваемая почка теленка из Америки, Т-1 линия, полученная Мироновой, почки теленка, фибробластоподобная). Клонирование линии перевиваемой культуры клеток позволяет получить стандартный монослой. Перевиваемую культуры клеток можно культивировать в суспензии - во взвешенном состоянии на микроносителях (ВНК-21). В колбу бросают расплодку клеток и шарики - используют цитолар.

Диплоидная культура клеток - это морфологически однородная популяция клеток, стабилизированная в процессе культивирования in vitro, имеющая ограниченный срок жизни (50+10) пассажей, характеризующаяся тремя фазами роста (стабилизации, активного роста, старения), сохраняющая в процессе пассирования кариотип, свойственный исходной ткани, свободная от контаминантов и не обладающая туморогенной активностью при трансплантации хомячкам. Л. Хейфлик и

П.С. Мурхед (1961) получили 25 штаммов диплоидных клеток из тканей эмбриона человека с помощью относительно простой методики, предложенной ими (исходную ткань измельчали и вносили во флаконы). Диплоидные культуры клеток получают из ткани почек свиньи (Хааг, Сантуччи (1963), из тканей эмбриона крыс, из нормальной ткани лимфоулов крупного рогатого скота (В №1 и №2), из кожи взрослых морских свинок, из кожи эмбриона коровы, из селезенки и костного мозга кролика (Э.Д. Мискарова, 1970). О.Г. Анджапаридзе, Д.Ф. Осидзе и др. (1973) получили культуры диплоидных клеток от эмбриональных и постнатальных тканей крупного рогатого скота, овец и свиней и впервые дали их биологическую характеристику в течение всего периода жизни.



Преимущества культуры клеток: 1) простота заражения и

получение вируса; 2) простота индикации вируса (ЦПД); 3) возможность непосредственного наблюдения к/клеток: 4) позволяет получить вирус с высоким титром и с меньшим балластом; 5) культивирование большинства вирусов.



Контрольные вопросы: 1 Культивирование вирусов в организме естественновосприимчивых животных. 2 Наиболее широко применяемые лабораторные животные в вирусологических исследованиях. 3 Требования к куриным эмбрионам, используемым в вирусологических исследованиях. 4 Культивирование вирусов на куриных эмбрионах. 5 Методы заражения куриных эмбрионов в вируссодержащими материалами. 6 Этапы получения культур клеток.

ИММУНИТЕТ



Факторы видовой невосприимчивости. В качестве примеров видового иммунитета можно привести невосприимчивость многих видов животных к вирусам чумы свиней, чумы крупного рогатого скота, африканской чумы однокопытных, невосприимчивость лошади, коровы, овцы, свиньи и других животных к вирусам эпидемического паротита (свинки) человека, ветряной оспы человека. Существует различная степень напряженности видового иммунитета - от абсолютной резистентности до относительной, которую удается преодолеть с помощью различных воздействий (большие дозы, предварительное рентгенооблучение, обработка кортизоном, изменение метода заражения при серийном пассировании на новорожденных и толерантных животных и т.п.).

Естественная невосприимчивость обусловлена отсутствием условий для размножения вируса из-за неспособности клеток обеспечить проникновение и депротеинизацию вируса. В естественно невосприимчивом организме отмечается ничтожный выход вируса за пределы местного очага. Подавляющая масса его разрушается в месте первичной локализации.

Примером влияния возраста на восприимчивость к вирусу является высокая чувствительность новорожденных мышат, крольчат и котят к вирусу ящура. Взрослые животные этих видов абсолютно резистентные к этому возбудителю. Многие онкогенные вирусы способны вызывать развитие генерализованных опухолей у сирийских хомяков, белых мышей и крыс при обязательном заражении их в новорожденном состоянии, когда способность их к иммунологической защите снижена. Видовой иммунитет (или его отсутствие) к определенному вирусу генетически обусловлен (детерминирован) и передается из поколения в поколение в пределах определенных генетических линий одного и того же вида животных.

Неспецифические факторы иммунитета. Неспецифические клеточные и общефизиологические реакции (участие интерферона, неспецифических ингибиторов, физиологическая температура тела, пиноцитоз вирусных частиц, фагоцитоз зараженных вирусом клеток). Интерферон - особый противовирусный белок, продуцируемый зараженными клетками или целым организмом. Открыли его английские вирусологи Айзекс и Линденман (1957). Этому открытию предшествовало большое число работ по вирусной интерференции. Интерферон не влияет на адсорбцию вируса, виропексис, депротеинизацию вирионов, освобождение вирусной нуклеиновой кислоты, композицию вирионов и выход их из клетки. Он не действует на внеклеточный (экстрацеллюлярный) вирус, он подавляет его репродукцию, т.е. действует на вирус непосредственно через чувствительные клетки, в которых не нарушен синтез клеточной РНК и клеточных белков.

Интерферон защищает клетки от вирусной инфекции лишь в том случае, если воздействует на них до контакта с вирусом. В организме и в клеточных культурах он оказывает как иммуностимулирующее, так и иммуносупрессивное действие, причем последнее особенно выражено при использовании концентрированного препарата. Интерферон активизирует эффекторные клетки иммунной защиты, главным образом макрофаги и киллерные клетки, повышая их способность убивать опухолевые клетки. Он тормозит рост пролиферирующих клеток, в том числе опухолевых. Защитная роль высокой температуры была показана при экспериментальном заражении кроликов вирусом миксомы; содержание их в условиях 39-40°С предупреждало гибель животных от вирулентного штамма вируса. Напротив, низкая температура внешней среды способствовала усилению тяжести вакцинальной инфекции кроликов, вызванной аттенуированным штаммом. Лихорадка является главным фактором, содействующим выздоровлению от вирусной инфекции. В защитных реакциях организма принимают участие два антогонистически действующих гормона: кортизон и соматотропный гормон. Большие дозы кортизона снижают резистентность организма, как к бактериальным, так и к вирусным инфекциям; он понижает воспалительную и фагоцитарную реакции, замедляет клиренс крови от бактерий и вирусов, понижает продукцию антител и интерферона. Видимо, этим объясняется тяжелое течение вирусных инфекций у животных, обработанных кортизоном. Малые дозы кортизона, наоборот, повышают защитные функции организма. Соматотропный гормон, или гормон роста, продуцируемый передней долей гипофиза, в отличие от кортизона активирует воспалительный процесс, усиливает активность плазматических клеток, которые продуцируют антитела.



Беременность усиливает тяжесть течения полиомиелита и оспы. Тестикулярный, овариальный гормоны выраженно влияют на снижение резистентности мышей к вирусу ЕМС. Также влияет усиление секреторно-выделительной функции клеток, что способствует освобождению их от вируса, образование в пораженных вирусом гриппа эпителиальных клетках цитоплазматических оксофильных включений. Полагают, что такие включения представляют «микроколонии» вирусных частиц и являются своеобразной защитной реакцией клетки. Преобладание оксофильных телец-включений свидетельствует о более легком, а базофильных - о более тяжелом течении экспериментальной гриппозной инфекции. К неспецифическим факторам противовирусного иммунитета относится функция выделительной системы. Так, вирусы эктромелии и герпеса, введенные в организм естественно невосприимчивых животных и иммунных животных, могут выделяться со слюной, с секретом респираторного тракта, молоком, через кишечник. Кроме антител специфического фактора противовирусного иммунитета организм вырабатывает особые вирусотропные вещества - ингибиторы, способные взаимодействовать с вирусами и подавлять их активность. Сывороточные ингибиторы обладают широким диапазоном действия: одни подавляют гемагглютинирующие свойства вирусов, другие - их цитопатогенное действие, третьи - их инфекционную активность. Для освобождения сывороток от ингибиторов существует ряд методов: обработка углекислым газом, фильтратом холерного вибриона, ацетоном, перйодатом калия или натрия, риванолом. Но не методы удобны в работе и гарантируют полное устранение ингибиторов из сывороток животных. Помимо сывороточных ингибиторов описаны ингибиторы тканей, секретов и экскретов животных, в том числе и птиц. При вирусных инфекциях важную роль играют как гуморальный, так и клеточный иммунитет. Основное внимание уделялось антителам, поскольку их выявление и количественное определение не представляют особого труда. Предпринимались попытки разграничить роль гуморального и клеточного иммунитета при вирусных инфекциях. В большинстве опытов, однако, грань, между двумя типами иммунитета казалась нечеткой, и, кроме того, трудно оценить возможное участие интерферона.

Специфические факторы иммунитета. Образование его связано с участием В-лимфоцитов в продукции антител класса G, М, А и Е, а также с участием Т-лимфоцитов. Еще в 60-е годы было установлены два основных класса лимфоцитов: Т-клетки, развивающиеся в тимусе, ответственные за клеточный иммунитет и В-клетки, которые развиваются независимо от тимуса, ответственны за антителопродукцию. Однако некоторые из Т-клеток играют важную роль в регуляции иммунитета и функционируют как помощники В- клеток в процессе гуморального ответа. Т- и В-лимфоциты становятся морфологически различимыми только после стимуляции антигеном. Нестимулированные Т- и В-клетки выглядят очень сходно даже в электронном микроскопе: это обычно небольшие, лишь немногим крупнее эритроцита клетки, в которых большую часть объема занимает ядро. Те и другие активизируются антигеном, вызывающим их пролиферацию и дифференцировку. Активизированные В-лимфоциты дифференцируются и становятся в дальнейшем продуцентами антител из этих клеток, Т-клетки не секретируют антител. Иммунная система организма работает по принципу клональной селекции. Согласно этого принципа (М.Ф. Бернет) каждый лимфоцит в ходе своего развития приобретает способность реагировать с определенным антигеном, хотя раньше он никогда не подвергался его воздействию. Это обусловлено тем, что на поверхности клетки появляются белки-рецепторы, которые специфически соответствуют данному антигену. Связывание антигена с этими рецепторами активизирует клетку, вызывая ее размножение и созревание ее потомков. Таким образом, чужеродный антиген селективно стимулирует те клетки, которые несут комплементарные ему специфические рецепторы, и поэтому неизбежно будут реагировать именно на этот антиген, вот почему иммунные ответы антигеноспецифичны.

Иммунная система, так же как и нервная, обладает памятью. Поэтому организм может пожизненный иммунитет ко многим вирусным болезням после однократной встречи с вирусом. Известно, что при однократном введении животному антигена А через несколько дней у него появится иммунный ответ (гуморальный и клеточный). Этот ответ быстро усиливается, а затем плавно снижается. Он получил название первичного иммунного ответа, наблюдаемого при первом контакте животного с антигеном. Если через несколько недель, месяцев или даже лет животному вновь ввести антиген А, у него появится вторичный иммунный ответ, отличающий от первичного: лаг-период короче, реакция сильнее и продолжительнее. Эти различия показывают, что животное «запомнило» свой первый контакт с антигеном А. Отсутствие иммунного ответа на собственные антигены организма обусловлено естественной иммунологической толерантностью. Однако в тех случаях, когда Т- или В-клетки реагируют на антиген тканей собственного организма, возникают так называемые аутоиммунные реакции, ответственные за целый ряд болезней.

Защитное действие антител объясняется не просто их способностью связывать антиген. Они выполняют и целый ряд других функций, в которых участвует «хвост», называются эффекторными функциями и обусловлены не участием в них «хвоста», а структурой Бс-фрагмента.

Молекула иммуноглобулинов G, Д, Е и сывороточного IgА состоит из четырех полипептидных цепей - двух легких и двух тяжелых. Основную структурную единицу молекулы антитела образуют четыре полипептидные цепи - две идентичные легкие (L-цепи, каждая примерно из 220 аминокислот) и две идентичные тяжелые (Н-цепи, каждая примерно из 440 аминокислот). Все четыре цепи соединены между собой с помощью нековалентных взаимодействий и ковалентных связей. Молекула состоит из двух одинаковых половинок, в которых L- и Н- цепи вносят абсолютно равный вклад в построение двух идентичных антигенсвязывающих участков.

Т-клетки имеют на поверхности антигенетические рецепторы. При стимуляции антигеном Т-клетки осуществляют три разные функции: 1) специфически убивают чужеродные клетки или собственные клетки организма, инфицированные вирусами; 2) помогают специфические Тили В-лимфоцитами отвечать на антиген и могут активизировать некоторые другие клетки, например макрофаги; 3) супрессируют ответы специфических Т- или В-лимфоцитов. Эти различные функции осуществляются разными субпопуляциями Т-клеток - цитотоксическими Т-клетками (киллерами), Т-клетками-хелперами (или индукторами) и Т-клетками-супрессоры действуют как регуляторы иммунного ответа, эти два типа Т-лимфоцитов называют Т-клетками- регуляторами. Помимо того, Т-хелперы активизируют макрофаги путем секреции лимфокинов (или интерлейкинов- посредников между лейкоцитами). Одним из наиболее изученных лимфокинов является фактор, ингибирующий миграцию макрофагов. В результате последние начинают более активно фагоцитировать и переваривать внедрившиеся бактерии и вирусы. Другой важный лимфокин, выделяемый определенными Т-хелперами - это фактор роста Т-клеток (интерлейкин


  1. . Он связывается с рецепторами на поверхности активизированных Т- клеток и стимулирует их пролиферацию.

Пожизненный иммунитет, наблюдаемый после ряда вирусных заболеваний, например оспы, кори и желтой лихорадки, общеизвестен; в то время большинство взрослых людей несколько раз болеют гриппом и острыми респираторными заболеваниями. Эта ситуация зависит от ряда факторов, причем наиболее важные из них следующие: а) интенсивность реакции образования антител при генерализованных вирусных инфекциях и вероятность того, что повторные заражения не проявятся клинически; б) антигенная стабильность и, следовательно, монотипность вируса, вызывающего многие генерализованные инфекции, в отличие от вариабельности и множественности типов антигенов у других вирусов;

в) постоянное присутствие вируса или вирусных антигенов в организме.

Приобретенный иммунитет строго специфичен и по наследству не передается. Различают активно и пассивно приобретенный иммунитет. Первый из них развивается в результате естественного (клинически выраженного или бессимптомного) переболевания животного или после вакцинации живыми или убитыми вакцинами. Пассивно приобретенный иммунитет может быть создан искусственно путем введения в организм иммунных сывороток, гамма-глобулинов, иммунолактона, а также при введении эффекторных клеток, получаемых от сингенного иммунного донора, или приобретается от матери через плаценту, желток яйца и при спаивании молозива в первые дни жизни. Пассивно приобретенный иммунитет, создаваемый введением иммунных сывороток (гамма- глобулинов), непродолжителен- 10-15 дней; при употреблении молозива от иммунных матерей он иногда соответствует сроку подсосного периода в зависимости от напряженности иммунитета у матери. Резистентность передаваемая цыплятами через желток, также зависит от напряженности иммунитета у кур-несушек.

Продолжительность активно приобретенного иммунитета в результате переболевания зависит от таких факторов, как иммуногенная активность вируса, способ введения его и возраст животного. После перенесения кори, желтой лихорадки, чумы крупного рогатого скота, ньюкаслской болезни, оспы у животных сохраняется продолжительный и напряженный иммунитет. При других вирусных инфекциях, например при гриппе птиц, лошадей, свиней, инфекционном бронхите кур, он весьма короткий и исчисляется несколькими месяцами.

К группе защитных антител принадлежат только вируснейтрализующие антитела, действующие на наружные корпускулярные антигены вириона и избирательно подавляющие способность вирусов к репродукции благодаря блокированию первых этапов взаимодействия вируса с чувствительными клетками. Вируснейтрализующие антитела стимулируют фагоцитоз зараженных вирусами клеток макрофагами, в результате чего в цитоплазме макрофага изолируется и обезвреживается скопление инфекционных вирионов и их ядовитых продуктов. Так как вирусы - сложные антигены, часть которых связана с антигенами наружной оболочки вируса, часть- с внутренним нуклеопротеидом, то и противовирусные антитела обладают выраженной гетерогенностью с широким спектром антител (грипп, адено-, риновирусы).

В последние годы все большее внимание исследователей привлекают иммуноглобулины биологических жидкостей организма и прежде всего секреторные иммуноглобулины, обеспечивающие местный иммунитет. Эволюция позвоночных организмов создала дополнительную иммунологическую систему, получившую название местного секреторного иммунитета. Накопилось много фактов, свидетельствующих о важной роли факторов местной защиты при вирусных инфекциях. Истинная природа этого процесса прояснилась лишь в 1959 г., когда был выделен иммуноглобулин А (IgA), присутствующий на слизистых покровах и секретируемый местно плазматическими клетками, а не являющейся продуктом сывороточной транссудации. Секреторный IgA отличается от сывороточного наличием не одного, а двух полипептидов и секреторный компонент. Причем каждая из этих двух цепей имеет не одну, а много антигенных детерминант. IgM также продуцирует местно и проявляет свойства, сходные со свойствами секреторного 1§А. Секреторные антитела класса IgM являются основным иммуноглобулином в кишечных секретах телят, у которых еще отсутствует жвачка. Видимо, он играет роль в защите слизистой оболочки кишечника. Недавно было установлено, что класс иммуноглобулинов Е синтезируется плазматическими клетками, расположенными в слизистых поверхностях дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта, что основная биологическая функция антител IgE состоит в способности их прикрепляться к поверхности тучных клеток. Полагают, что IgE способствуют прохождению защитных антител через эпителиальный слой слизистой оболочки.



Контрольные вопросы: 1.Факторы видовой невосприимчивости. 2.

Неспецифические факторы иммунитета. 3. Специфические факторы иммунитета. 4. Взаимодействие факторов иммунитета и их единство.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11


База данных защищена авторским правом ©zubstom.ru 2015
обратиться к администрации

    Главная страница