Методические указания для самостоятельной работы студентов под руководством преподавателя



Скачать 434.58 Kb.
страница1/3
Дата26.08.2015
Размер434.58 Kb.
  1   2   3
Ф КГМУ 4/3-06/03

ПП КГМУ 4/02

Карагандинский государственный медицинский университет


Кафедра микробиологии

Методические указания для самостоятельной работы студентов

под руководством преподавателя
Тема: Экология микроорганизмов. Микрофлора окружающей среды. Основы санитарно-микробиологических исследований. Зоны микробного загрязнения в стоматологическом кабинете. Нормальная микрофлора организма человека. Микрофлора полости рта. Дисбактериоз, халитозис

Дисциплина Mic 2210 - Микробиология


Специальность 5В130200 – Стоматология
Курс: 2
Составитель коллектив кафедры микробиологии

Караганда 2014 г.


Обсуждены и утверждены

на заседании кафедры микробиологии



Протокол № 1 от 29.08.2014 г.
Зав. кафедрой, доцент ___________________ Ахметова С.Б.


  • Тема Экология микроорганизмов. Микрофлора окружающей среды. Основы санитарно-микробиологических исследований. Зоны микробного загрязнения в стоматологическом кабинете. Нормальная микрофлора организма человека. Микрофлора полости рта. Дисбактериоз, халитозис.

  • Цель по окончании занятия студенты должны быть способны знать типы симбиоза микроорганизмов, нормальную микрофлору человека и ее функцию, дисбактериоз, причины его возникновения и его коррекцию, санитарно-показательные микроорганизмы, методы определения СПМО в объектах окружающей среды.

  • Задачи обучения

    • Студент должен знать:

  • что такое эубиоз (нормоценоз);

  • отличие состава микрофлоры ребенка от микрофлоры взрослых;

  • факторы, способствующие развитию дисбактериоза; степени дисбактериоза, его клинические и бактериологические показатели;

  • принципы коррекции дисбактериоза;

  • санитарно-показательные микроорганизмы объектов окружающей среды.

  • Студент должен уметь:

  • осуществить забор материла для исследования на дисбактериоз кишечника;

  • подготовить фекалии для десятикратных разведении в физиологическом растворе;

  • подобрать питательные среды для посева разведения фекалий на выявление аэробных и анаэробных бактерий;

  • владеть методическими приемами взятия материала для микробиологических исследований на оценку количественного и качественного состава основных биотопов организма человека

  • объяснить схему микробиологической диагностики на дисбактериоз кишечника;

  • проводить оценку санитарно–бактериологического состояния воздуха, воды и смывов с рук, предметов.




  • Форма проведения: углубленное изучение вопросов практических занятий, решение ситуационных задач, тестовых заданий.

  • Задания по теме:

  1. Приготовление серийных разведений для исследования на дисбактериоз кишечника.

Посев на питательные среды. 1-й день исследования на дисбактериоз кишечника.

а) посев газоном на плотные питательные среды;

б) посев по Шукевичу;

в) глубинный посев на среду Блаурок.

Решение ситуационных задач по дисбактриозу.


  1. Санитарно-бактериологическая оценка объектов окружающей среды: воздуха, воды, почвы:

а) провести оценку санитарно-бактериологического состояния воздуха по общему микробному числа (ОМЧ) на МПА и количеству гемолитических стрептококков на кровяном агаре. Сделать расчет ОМЧ по формуле Омелянского. Оценить чистоту воздуха по справочной таблице.

б) провести оценку санитарно-бактериологического состояния питьевой воды по результатам посевов. Определить ОМЧ, коли- титр, коли- индекс. Оценить чистоту воды по справочной таблице. Сделать вывод.



  1. Санитарно-бактериологическая оценка чистоты рук персонала: учесть результат готового посева смывов с рук на среде Кесслера. Сделать вывод.

  2. Исследовать собственную микрофлору и микрофлору загрязнения кожи рук

  3. Оформление результатов исследования в протоколе.




  • Раздаточный материал (при необходимости или ссылки на него)

Нормальная микрофлора человека

Микрофлора биотопа

Ориентировочное содержание микроорганизмов

Кровь, лимфа, внутренние органы, головной и спинной мозг, спинномозговая жидкость

В норме не содержат микробов и являются стерильными

Кожа :

Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus saprophyticus

Corynebacterium spp.

Streptococcus spp.

Bacillus spp., Candida spp., Pseudomonas aeruginosa



102 - 104 на 1 см3



Желудочно-кишечный тракт:

Полость рта:

Streptococcus salivarius, S.mitis, S.mutans, S.sanguis

Lactobacillus spp. , Bifidobacterium spp.

Leptotrichia buccalis. Veilonella spp., Bacteroides spp,

Candida spp.

Treponema skoliodontum, T.denticola

Neissena spp. , Mycoplasma spp. , Staphylococcus spp.

Желудок – многие погибают при кислом значении рН, встречаются:

Sarcina ventriculi, Lactobacillus spp

Candida spp. A

Тонкая кишка — в верхних отделах кишки микрофлора представлена скудно в связи с активностью ферментов. Число микроорганизмов постепенно нарастает в илеоцекальном отделе

Толстая кишка — благоприятные условия для

разнообразной микрофлоры, выделяются с

фекалиями:

Анаэробы (в совокупности)

Bacteroides spp.

Bifidobacterium spp.

Lactobacillus spp.

Clostridium spp.

Veilonella spp.
Аэробы

E.coli и др. энтеробактерии

Streptococcus faecalis, Bacillus spp.

108 в 1 мл слюны


Не более 103 в 1 мл содержимого

Около 105 в 1 мл содержимого

1010 в 1 г фекалий



Конъюнктива глаза — очень часто микроорганизмы полностью отсутствуют, могут встречаться:

Staphylococcus epidermidis

Corynebacterium spp.





Уши (наружный слуховой проход) — факультативно встречаются: Staphylococcus epidermidis

Corynebacterium spp.

Candida spp.





Дыхательная система (верхние дыхательные пути)

Staphylococcus saprophyticus

Streptococcus spp.

Klebsiella spp.

Neisseria catarralis
Candida spp. и др.

Мелкие бронхи, альвеолы и паренхима легких обычно не содержат микробов.






Мочеполовая система

Женские половые органы (влагалище и шейка матки)

Lactobacillus spp.

Corynebacterium spp.

Peptococcus spp.


Полость матки

Мужские половые органы

Mycobacterium smegmatis

Corynebacterium spp.

Staphylococcus epidermidis



и др.

Дистальная треть уретры (женщин и мужчин)

Peptostreptococcus spp., Peptococcus spp. , Corynebacterium spp, Mycoplasma hominis , Staphylococcus epidermidis



Моча в почках, мочеточниках и мочевом пузыре.
При естественном мочеиспускании микробы попадают в мочу с наружного участка уретры

Число микробов в совокупности составляет 1010 в 1 мл влагалищного секрета. Соотношение анаэробов к аэробам 10:1.


Стерильна
Стерильна

Число микробов не должно превышать 103 КОЕ/мл




Дисбактериоз ротовой полости - причины развития

Дисбактериоз ротовой полости – это не заболевание, а ряд симптомов, развивающихся в результате нарушения правильного соотношения микрофлоры, обитающей в полости рта. В полости рта в норме обитают отдельные виды стрептококков и стафилококков, лактобактерии, грибы рода Candida и некоторые другие микроорганизмы. Состав микрофлоры полости рта является индивидуальной особенностью каждого человека.

Чаще всего дисбактериоз полости рта развивается на фоне кишечного дисбактериоза, который в свою очередь является следствием какого-то хронического заболевания органов пищеварения. Очень часто дисбактериоз кишечника развивается на фоне частого бесконтрольного приема антибиотиков.

Естественная микрофлора кишечника способствует не только расщеплению и усвоению питательных веществ. Она вырабатывает витамины группы В, а также способствует усвоению жирорастворимых витаминов – А, Е и D. Дисбактериоз приводит к дефициту этих витаминов, что сказывается на состоянии слизистой оболочки полости рта и красной каймы губ.






Дисбактериоз полости рта может быть также следствием частого бесконтрольного применения местных антисептиков, в том числе различных пастилок, полосканий и зубных паст.

Симптомы дисбактериоза полости рта

Симптомы дисбактериоза полости рта зависят от его степени. Дисбактериоз бывает компенсированным, субкомпенсированным и декомпенсированным.

Компенсированный дисбактериоз или дисбиотический сдвиг протекает, как правило, бессимптомно и обнаружить его можно только лабораторными методами. Диагностика дисбактериоза полости рта выявляет повышенное содержание одного из видов условно-патогенных микроорганизмов. Объем нормальной микрофлоры не страдает.

Субкомпенсированный дисбактериоз проявляется в виде неприятного запаха изо рта, металлического привкуса, жжения во рту. При исследовании микрофлоры обнаруживается увеличение объема условно-патогенной микрофлоры, появление патогенных микроорганизмов и снижение содержания лактобактерий.

Декомпенсированный дисбактериоз полости рта проявляется в виде различных проявлений гиповитаминоза – заед, воспалительных процессов в области десен и языка с присоединением к ним инфекции.

В результате у больных начинаются стоматиты, пародонтиты и пародонтозы (воспалительные и обменно-дистрофические заболевания околозубных тканей), а если их не лечить, происходит расшатывание и выпадение зубов. Возможно также присоединение инфекций носоглотки. Условно-патогенная и патогенная микрофлора в этот период резко увеличивается в объеме, а нормальная практически исчезает



Лечение дисбактериоза полости рта

Лечение дисбактериоза ротовой полости будет неэффективным, если не повести полное обследование больного, не выявить наличие дисбактериоза кишечника и хронических заболеваний органов пищеварения.

Избавиться от дисбактериоза полости рта можно только путем комплексного лечения всех заболеваний, которые стали причиной его развития.

Для подавления патогенной и условно-патогенной микрофлоры полости рта применяют местные антибактериальные средства, например, спрей тантум-верде. При тяжелых дисбактериозах полости рта назначают антибактериальные препараты системного действия, например, трихопол и различные антибиотики.

После этого назначают пре- и пробиотики. К пребиотикам – лекарственным препаратам, способствующим улучшению условий жизнедеятельности полезной микрофлоры, относятся препараты на основе лактулозы – дюфалак, нормазе, порталак. Их принимают внутрь.

Внутрь также назначают пробиотики, в состав которых входят колонии бактерий, входящих в состав нормальной микрофлоры. Это бифидумбактерин, бифифор, пробифор, лактобактерин, аципол. Местно назначают пробиотик для местного применения ацилакт, в состав которого входят лактобактерии.

Восстановление местного иммунитета проводится при помощи имудона – таблеток для рассасывания в полости рта, в состав которых входит смесь лизатов (содержимого разрушенных клеток) бактерий, наиболее часто вызывающих воспалительные процессы в полости рта и глотки. Под действием имудона активизируется клеточный иммунитет, повышается образование биологически активных веществ, подавляющих инфекционные процессы.

Дисбактериоз полости рта требует предварительного тщательного обследования и лечения всех выявленных заболеваний органов пищеварения


Микробиологическое исследование на дисбактериоз кишечника

Материалом для исследования являются фекалии обследуемого, собранные с специально подготовленную посуду.

Предварительно готовится посуда для сбора материала для исследования. Пенициллиновые флаконы тщательно промываются с целью удаления остаточных количеств лекарственных препаратов, ранее содержащихся в них. В резиновую крышку флакона вставляется проволочный шпатель имеющий на конце специальный изгиб по типу минишпателя для взятия материала. Флакон вместе с крышкой и шпателем заворачивается в упаковочную бумагу и стерилизуется. После стерилизации флакон взвешивается и на упаковке указывается вес флакона с точностью до 10 мг.

Перед взятием материала больной не должен менять характер питания, применять антибиотики, бактерийные препараты (пробиотики, эубиотики и т.п.) в течение 2-3 дней. Для исследования с помощью шпателя берется 1 грамм фекалий, который помещается в пенициллиновый флакон, заворачивается в упаковочную бумагу (бумага при вскрытии упаковки не должна рваться, с целью сохранения начального веса флакона) и доставляется в лабораторию в теплом виде не позднее 2 часов с момента взятия материала.

При доставке материала в лабораторию флакон вместе с исследуемым материалом повторно взвешивается с целью определения количества фекалий. Из доставленного материала готовится ряд 100-кратных разведений от 10-1 до 10-7

Для приготовления первого разведения к 1 грамму фекалий добавляется 9 мл стерильно подогретого до комнатной температуры физиологического раствора, фекальные массы тщательно гомогенизируются в физ.растворе, после чего делается высев на плотные питательные среды для выявления патогенных энтеробактерий: на висмут-сульфит агар (для выявления сальмонелл), на среду Плоскирева и (или) среду Левина (для выявления лактозонегативных патогенных энтеробактерий – шигелл, диареегенных E.coli, йерсиний). Производится рассев методом «газона» по всей поверхности чашки.

Разведение 10-3 (и последующие разведения 10-5 и 10-7) готовится путем переноса стерильной 1мл пипеткой 0,1 мл материала из разведения 10-1 в пробирку с 9,9 мл физиологического раствора. Содержимое пробирки тщательно перемешивается. Учитывая, что в разведении 10-3 содержание микроорганизмов достаточно высоко, производится высев по 0,1 мл на элективные питательные среды: на желточно-солевой агар (ЖСА) для обнаружения стафилококков, на среду Сабуро с добавлением теллурита калия (для подавления роста грамотрицательной микрофлоры) для выявления грибов, на среду для лактобактерий для количественного определения лактобактерий. С этого же разведения производится высев на скошенный агар по методу Шукевича для выявления микроорганизмов рода Proteus.

Из разведений 10-5 и 10-7 проводится высев по 0,1 мл на среду Эндо для выявления лактозоположительных и лактозонегативных энтеробактерий, на кровяной агар (КА) для выявления других аэробных и факультативно-анаэробных групп микроорганизмов.

Для выявления бифидобактерий параллельно проводится высев по 0,1 и 1 мл из разведений 10-5, 10-9 на среду предварительно редуцированную среду Блаурока. Таким образом, с учетом разведения в среде получается высев в разведениях от 10-6 до 10-11.
Оценка результатов при исследовании на дисбактериоз


  1. Сопоставляют полученные данные с количественным содержанием микроорганизмов в норме. Ориентировочные критерии нормальной микрофлоры толстого кишечника представлены в таблице 3.

Таблица 3. Критерии нормальной микрофлоры толстого кишечника



Микроорганизмы

Норма в 1 г фекалий

Патогенные микробы сем. Enteribacteriaceae

0

Общее количество E.coli, млн/г

300-400

Общее количество E.coli со слабовыраженными ферментативными свйоствами, %

до 10

Общее количество E.coli с гемолитическими свойствами, %

нет

Энтеробактерии (лактозонегативные и лактозопозитивные): Hafnia, Enteribacter, Citrobacter, Klebsiella, Serracia,%

до 5

Кокковые формы в общей сумме выделенных культур, %

до 25

Гемолитический стафилококк по отношению ко всем кокковым формам, %

нет

Бифидобактерии (рост при посеве разведения)

10-7

Бактерии рода Proteus

нет

Грибы рода Candida

нет




  1. При кишечном дисбактриозе происходит значительное снижение облигатной микрофлоры, и в первую очередь бифидобактерий, а также увеличение аэробных видов, в частности E.coli, содержание которых может превышать 1011 микробных клеток в 1 г испражнений.

  2. Увеличивается частота обнаружения штаммов E.coli со слабой ферментативной лактозы и имеющих гемолитические свойства (до 30-40%), гемолитических и негемолитических стафилококков, бактерий рода Proteus, грибов рода Candida (до 10-15%).

  3. У лиц с дисбактриозами более часто обнаруживают лактозонегативные и лактозопозитивные энтеробактерии, относящиеся к родам Hafnia, Enterobacter, Citrobacter и др.

  4. Для микробов, отсутствующих в испражнениях или имеющихся в небольшом количестве, показателем дисбактериза будет содержание их 105-106 и выше КОЕ в 1 г материала (Proteus spp, Kl.pneumoniae, Ps. Aeruginosa, St.aureus, Candida spp. и др.).


Бактериологические и биохимические критерии оценки

степени дисбактериоза кишечника

На основании микробиологических и биохимических критериев эубиоза и дисбиоза разработана классификация степеней тяжести дисбиотического процесса в толстой кишке. Эта характеристика степеней тяжести дисбактериоза толстой кишки может рассматриваться как основа практической оптимизации современных подходов к лечению и профилактике дисбиозов.



I степень тяжести - увеличено или уменьшено общее количество кишечных палочек. Кишечные палочки с атипичными свойствами отсутствуют. Количество бифидобактерий и лактобацилл не изменено. Изменения в общих показателях микробного метаболитного паспорта фекалий характерны лишь в отношении пула летучих жирных кислот, содержания фенилпропионовой кислоты, скатола и метиламина. Общее содержание летучих жирных кислот у больных с I степенью тяжести дисбактериоза может быть меньшим или большим по сравнению со здоровыми лицами. Снижено содержание скатола. Напротив, содержание фенилуксусной кислоты и метиламина повышено. Отмечаются изменения удельного веса щавелевоуксусной кислоты в профиле ДКК. Дисбактериоз латентный, компенсированный, кишечные дисфункции не регистрируются.

II степень - незначительно снижено количество бифидобактерий и лактобацилл. Наблюдаются количественные и качественные (появление форм с атипичными биологическими свойствами) изменения кишечных палочек. Высеваются в незначительном количестве условно-патогеннные кишечные микроорганизмы. Отмечаются изменения как в общих, так и в специфических показателях микробного метаболитного паспорта фекалий, что выражается в снижении величины экскреции с фекалиями фенольных соединений: n-крезола и индола. В десятки раз уменьшается количество скатола в испражнениях. Обратная картина наблюдается в отношении фенилпропионовой кислоты, количество которой на порядок превышает таковое у здоровых лиц. Профиль ФС также меняется: удельный вес индола возрастает более чем в 2 раза, несколько понижен удельный вес n-крезола и более чем в десять раз снижен удельный вес скатола. В целом экскреция с фекалиями карбоновых и ароматических аминокислот, фенольных и индольных соединений (за исключением фенилаланина) при II степени тяжести дисбиоза снижена. Снижается экскреция с фекалиями гистамина и серотонина. Изменен АмП: удельный вес гистамина и серотонина ниже, удельный вес представителя простых аминов - метиламина выше. Дисбактериоз локальный (местный), субкомпенсированный, кишечные дисфункции, как правило, не наблюдаются.

III степень - значительное снижение количества бифидобактерий (105-106) в сочетании со снижением количества лактобацилл и резким изменением типичных свойств кишечных палочек (значительное преобладание гемолитических, лактозонегативных форм). Увеличение количества условно-патогенных бактерий с патогенными свойствами (гемолиз эритроцитов) и дрожжеподобных грибов (рода Кандида, Геотрихум и др.). Характерны еще более выраженные изменения как в общих, так и в специфических показателях микробного метаболитного паспорта фекалий. Снижена величина экскреции с фекалиями фенольных соединений: n-крезола и индола. В фекалиях практически отсутствует скатол. Напротив, содержание фенилпропионовой кислоты в каловых массах резко увеличивается. Профиль ФС меняется таким образом, что существенно увеличивается удельный вес индола и значительно снижается удельный вес n-крезола. Существенно изменяется величина экскреции аминов: содержание в фекалиях гистамина и серотонина может быть выше или ниже по сравнению с нормой (зависит от нозологической формы основного заболевания). Содержание карбоновых кислот в фекалиях больных с III степенью дисбиоза меняется следующим образом: резко уменьшается пул ЛЖК, практически не обнаруживается щавелево-уксусная кислота и значительно возрастает экскреция с каловыми массами -кетоглутаровой кислоты. Изменен профиль ЛЖК. При нарушениях стула по типу диареи удельный вес уксусной кислоты ниже, удельный вес пропионовой и масляной кислоты, наоборот, повышен, при констипации наблюдается противоположная картина. Отмечается снижение или увеличение удельного веса молочной и аналогичные изменения удельного веса -кетоглутаровой кислоты в профиле ДКК. Дисбактериоз локальный (местный), декомпенсированный, кишечные дисфункций, как правило, наблюдаются.

IV степень - резкое снижение или отсутствие бифидобактерий, значительное уменьшение количества лактобацилл, резкое уменьшение количества или отсутствие кишечных палочек с типичными свойствами, значительное возрастание количества как облигатных, так и факультативных видов (в норме не встречающихся) кишечных бактерий и дрожжеподобных грибов с патогенными свойствами. Выявляются патогенные бактериии (сальмонеллы, шигеллы, иерсинии). Качественные изменения в микробном метаболитном паспорте остаются такими же, как и при III степени, но их количественные характеристики еще более изменены, характерна глубокая разбалансировка биохимических регуляторных механизмов микробной экосистемы, сочетающаяся с аналогичной разбалансировкой микробной инфраструктуры кишечника. Дисбактериоз распространенный (с бактериемией), декомпенсированный (с угрозой генерализации инфекции, сепсиса или септикопиемии), наблюдаются выраженные кишечные дисфункции.
  1   2   3


База данных защищена авторским правом ©zubstom.ru 2015
обратиться к администрации

    Главная страница